六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响

发布时间：2017-03-25 12:16

  本文关键词：六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：通过观察六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响,探讨六味地黄丸防治椎间盘退变的疗效。 方法：将80只6月龄清洁级新西兰兔随机分为六味地黄丸组(A组)、模型组(B组)、假手术组(C组)、空白对照组(D组),每组20只。模型组、六味地黄丸组予建立椎间盘退变动物模型,全麻后消毒铺巾,经左腹前外侧入路依次切开皮肤、腹外斜肌、腹内斜肌、腹横肌,沿腰大肌肌间隙推开后腹膜和大血管,暴露L4/5和L5/6椎间隙,用10μ l的微量注射器随机选择椎间盘注射入10ng/μl TNF-α溶液1u l,注射后标记好实验动物的椎体并予生理盐水冲洗,依层次缝合,放回笼中。假手术组行相同手术入路进入腰椎,再依次缝合组织。切口予络合碘涂擦消毒。术后给予青霉素400万单位肌注防感染,每天1次,连续使用3天。将六味地黄丸胶囊溶于生理盐水后,六味地黄丸组给予六味地黄胶囊溶液10mg/kg灌胃,每天1次；模型组、假手术组、空白对照组灌予等量生理盐水,每天1次,自然喂养。于最后一次灌胃后4小时分2周、4周、6周、8周分批次处死动物,留取椎间盘标本。酶联免疫法测定椎间盘终板糖胺多糖(glycosaminoglycan, GAG)总量、硫酸软骨素(chondroitin sulfate, CS)和硫酸角质素(keratan sulfate, KS)比值,放射免疫法测定透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量。RT-PCR检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原的mRNA含量,Western Blot检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原的表达。 结果：假手术组新西兰兔与模型组相比较,模型组兔蛋白多糖的表达及mRNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、Ⅱ型胶原的表达及mRNA含量均明显低于假手术组,亦低于空白对照组,工型胶原含量及mRNA表达明显高于假手术组,亦高于空白对照组,P0.05,其差异有统计学意义,说明兔椎间盘模型成功建立。 模型组新西兰兔与六味地黄丸组相比较,模型组兔蛋白多糖的表达及mRNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、Ⅱ型胶原的表达及mRNA含量均明显低于六味地黄丸组,Ⅰ型胶原含量及mRNA表达明显高于六味地黄丸组,P0.05,其差异有统计学意义。说明经六味地黄丸混悬液灌胃后,有一定的治疗效果。 六味地黄丸组内,手术后2周与4周、4周与6周、6周与8周相比较,蛋白多糖的表达及mRNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、Ⅱ型胶原的表达及mRNA含量逐渐降低,但与模型组比较,趋势较小；Ⅰ型胶原的表达及mRNA含量逐渐升高,但与模型组比较,趋势较小,P0.05,差异有统计学意义,表明六味地黄丸能有效延缓椎间盘的退变； 模型组内,2周与4周、4周与6周、6周与8周相比较,蛋白多糖的表达及mRNA含量、糖胺多糖含量、硫酸软骨素和硫酸角质素的比值、透明质酸含量、Ⅱ型胶原的表达及mRNA含量下降,Ⅰ型胶原的表达及mRNA含量升高,P0.05,差异有统计学意义,也说明椎间盘退变模型成功建立。 结论：六味地黄丸能上调椎间盘退变模型中糖胺多糖含量、硫酸软骨素／硫酸角质素比值、透明质酸含量,适度下调椎间盘退变模型中Ⅰ型胶原的表达,上调Ⅱ型胶原的表达,稳定了蛋白多糖含量,在一定程度上延缓了椎间盘的退变。
【关键词】：六味地黄丸 椎间盘退变 细胞外基质 蛋白多糖 糖胺多糖 硫酸软骨素 硫酸角质素 透明质酸 Ⅰ型胶原 Ⅱ型胶原
【学位授予单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-11
• 第一部分 材料与方法11-16
• 1. 实验材料11-12
• 1.1 实验动物11
• 1.2 实验用药11
• 1.3 主要试剂11
• 1.4 实验仪器11-12
• 2. 实验方法12-13
• 2.1 动物分组12
• 2.2 动物造模12
• 2.3 治疗(干预)方法12-13
• 2.4 标本采集13
• 3. 指标检测13-15
• 3.1 RT-PCR检测13-14
• 3.2 Western-blot检测14-15
• 3.3 酶联免疫法检测15
• 3.4 放射免疫法检测15
• 4. 统计处理15-16
• 第二部分 结果16-25
• 1. 各组兔基本情况16
• 2. 兔蛋白多糖16-17
• 3. 兔Ⅰ型胶原17
• 4. 兔Ⅱ型胶原17-18
• 5. 糖胺多糖18-19
• 6. 硫酸软骨素/硫酸角质素比值19-20
• 7. 透明质酸20-21
• 8. 蛋白多糖mRNA21
• 9. Ⅰ型胶原mRNA21-22
• 10. Ⅱ型胶原mRNA22-25
• 第三部分 分析与讨论25-30
• 1. 蛋白多糖(proteoglycans,PGs)与椎间盘退变(intervertebral discdegeneration,IDD)25
• 2. 胶原蛋白(collagen)与椎间盘退变(IDD)25-26
• 3. 动物模型的选择26-27
• 4. 中医对椎间盘退变的认识与研究27-28
• 4.1 椎间盘退变的病因病机27
• 4.2 中医治疗椎间盘退变的进展27-28
• 5. 六味地黄丸与椎间盘退变28-29
• 6. 本研究存在的问题与展望29-30
• 结论30-31
• 致谢31-32
• 参考文献32-35
• 附录35-47
• 附录1：攻读学位期间主要研究成果及发表论文35-36
• 附录2：文献综述36-46
• 参考文献42-46
• 附录3：剂量换算46-47
• 附录4：相关实验实物图47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈学武;徐宏光;;椎间盘退变生物学治疗研究进展[J];国际骨科学杂志;2006年04期

2 郭健行;黄桂成;;椎间盘退变影响因素研究进展[J];国际骨科学杂志;2008年01期

3 周红海,韦坚,施杞,沈培芝;益气化瘀补肾法对颈椎病动物椎间盘病理变化与Ⅱ型胶原mRNA表达的影响[J];广西中医药;2003年02期

4 杨勇;姜建元;吕飞舟;马晓生;夏新雷;王立勋;王洪立;;骨髓间充质干细胞治疗椎间盘退变研究进展[J];国际骨科学杂志;2012年03期

5 许理忠;王拥军;施杞;;中药益气化瘀方对体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞基质金属蛋白酶mRNA表达的影响[J];辽宁中医杂志;2008年11期

6 黄娟;六味地黄汤治疗肾虚腰痛116例[J];河南科技大学学报(医学版);2004年03期

7 钱祝民;;金匮肾气丸和六味地黄丸交替久服治疗慢性腰痛体会[J];山东中医杂志;2006年09期

8 段晓丽;;六味地黄丸的药理作用与临床应用[J];山西医药杂志;2009年12期

9 王拥军,孙鹏,周泉,刘梅,胡志俊,周重建,施杞;益气化瘀中药对大鼠椎间盘软骨细胞基因表达的影响[J];中西医结合学报;2005年02期

10 孙鹏;王拥军;施杞;周泉;刘梅;周重建;钱雪华;;益气化瘀方对椎间盘软骨细胞凋亡相关因子的作用[J];中国骨伤;2006年08期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 权学民;益气化瘀中药结合BMSCs移植干预腰椎间盘退变的实验研究[D];北京中医药大学;2011年

  本文关键词：六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘细胞外基质组分的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：267203