基于活性氧响应的聚合物纳米疫苗递送系统的构建及评价
发布时间：2020-05-28 13:41
【摘要】：疫苗(Vaccine)是用于预防传染病的抗原制剂,在预防和治疗重大传染病以及保护人类免受侵害的过程中发挥着极为重要的作用。重组抗原或多肽的亚单位疫苗已逐渐成为一种新型的疫苗。然而,诱导有效的免疫反应仍然是重大挑战。纳米颗粒抗原传递系统被认为是一种潜在的载体系统,可以提高亚单位疫苗效力。感染病毒等抗原后会引起淋巴细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)升高,过高浓度会促使淋巴细胞损伤凋亡;再如过量的ROS产生,特别是过氧化氢产生过剩从而引起炎症、触发细胞凋亡和组织氧化损伤。利用过量的ROS引起慢性炎症如炎症反应、癌症以及炎症后持续释放ROS浓度升高等疾病特点,设计ROS响应的聚合物材料制成纳米载体,降低病灶部位ROS浓度,同时实现靶向递送疫苗。因此,本论文采用简单的两步法合成了两亲性聚合物材料3s-PLGA-PO-PEG,该材料具有ROS响应性,探索了活性氧响应的纳米粒能否有效用于疫苗递送。此外,针对如何实现高效地疫苗递送问题,利用聚乙烯亚胺(Polyethylenemine,PEI)的疫苗佐剂特性和CD44靶向受体透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的纳米运载系统并进行体内外评价,为其更加合理地应用到疫苗领域提供参考。第一部分:我们设计了 3s-PLGA通过过氧草酸酯键连接聚乙二醇,制备了阳离子免疫佐剂PEI修饰的活性氧响应的纳米疫苗。过氧化氢清除实验验证了材料的活性氧响应性,细胞毒实验表明了纳米粒具有良好的细胞相容性,降低了 PEI的毒性。共聚焦观察纳米粒吞噬发现,纳米粒可实现溶酶体逃逸,可增强MHCⅠ类途径递送。纳米疫苗刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone Marrow-derived Dendritic Cells,BMDC)表面促成熟标记表达高于游离OVA组。纳米粒免疫小鼠后,相比游离OVA刺激淋巴细胞增殖较多,IgG表达增高。研究结果表明活性氧纳米载体系统具有良好的免疫刺激作用,诱导了树突状细胞的成熟,体内T细胞活化以及PEI具有作为免疫佐剂的潜力。第二部分:我们将通过外表面修饰具有CD44受体靶向的透明质酸过氧化氢敏感性的免疫递送系统。通过体外释放实验观察了其释放行为,体内示踪观察了其在体内的迁移情况,并进行了体内抗体测试和T细胞免疫应答评价。体外纳米粒增强树突状细胞的成熟,体外促进抗原摄取和抗原提呈。体内的免疫实验表明纳米粒有利于促进OVA特异性抗体产生和T细胞反应,同时伴有适度刺激的记忆T细胞的产生。HA修饰的ROS响应性的纳米粒可能是一种有效的抗原传递系统,促进抗原诱导免疫应答。
【图文】：
活性氧持续生成、转化、消耗，在各种生理过程中起关键性作用，与蛋白逡逑折叠、信号传导、细胞增殖分化迁移有关；同时与防御反应，呼吸作用，氧化损害逡逑也有关（如图１．１）。ＲＯＳ中最丰富和稳定的形式就是过氧化氢，，产生于细胞膜、线逡逑粒体、内质网和吞噬体。Ｌａｃｙ等人报告正常人血浆的过氧化氢范围在１－８ｍＭ，平均逡逑３邋ｍＭ［２－３】。肠道和尿道细胞的Ｈ２Ｃｈ可达到１０0ｎＭ［４］。呼吸道可产生０．１－１邋ｈＭＨ２0２，逡逑但是在患肺炎疾病时会提高２０倍。末期肾病（１３邋ｎＭ）、高血压血浆（７邋ｐＭ）、脑内逡逑缺血再灌注（１６０邋ｐＭ）、癌症、阿尔兹海默症中，在ｐ－淀粉样蛋白刺激下包括过氧逡逑化氢的ＲＯＳ浓度会增加三倍［５］。在大多数的癌细胞中过氧化氢生成率很高，通常发逦－逡逑现高达０．５邋ｎｍｏｌ／１０４细胞／ｈ【吹并且刺激多核白细胞１．５邋ｎｍｏｌ／１０４细胞／ｈ队吞嗟细逡逑胞相比其他细胞会产生和分泌高水平的Ｈ２０２。活化的中性粒细胞生成６ｘｌ0－１４邋ｍ0ｌ逡逑Ｈ２０２／ｈ／细胞，局部生成１０－１００0ｍＭ［８］。最近有报告称体内树突状细胞（ＤＣ）最有逡逑效的抗原呈递细胞（ＡＰＣ）中过氧化氢浓度可达１邋ｍＭ［９］。活性氧是一把双刃剑。逡逑生理状态下，低水平的活性氧是维持细胞正常功能所必需的，通过调节氧平衡参与逡逑各种信号通路，细胞通过抗氧化物质保持ＲＯＳ的平衡；在炎症产生时诱导细胞发生逡逑氧化应激
水平也无法生存，许多癌细胞通过激活ＧＳＨ或其他抗氧化分子来激活ＲＯＳ防御机逡逑制。因此X椉酉赴冢遥希油ü种瓶寡趸芰蛘咄卑邢颍牵樱群停遥希右彩茄″义显裥陨鄙酥琢龅牟呗裕ㄍ迹保常ｅ义希瑰义
本文编号：2685324
【图文】：
活性氧持续生成、转化、消耗，在各种生理过程中起关键性作用，与蛋白逡逑折叠、信号传导、细胞增殖分化迁移有关；同时与防御反应，呼吸作用，氧化损害逡逑也有关（如图１．１）。ＲＯＳ中最丰富和稳定的形式就是过氧化氢，，产生于细胞膜、线逡逑粒体、内质网和吞噬体。Ｌａｃｙ等人报告正常人血浆的过氧化氢范围在１－８ｍＭ，平均逡逑３邋ｍＭ［２－３】。肠道和尿道细胞的Ｈ２Ｃｈ可达到１０0ｎＭ［４］。呼吸道可产生０．１－１邋ｈＭＨ２0２，逡逑但是在患肺炎疾病时会提高２０倍。末期肾病（１３邋ｎＭ）、高血压血浆（７邋ｐＭ）、脑内逡逑缺血再灌注（１６０邋ｐＭ）、癌症、阿尔兹海默症中，在ｐ－淀粉样蛋白刺激下包括过氧逡逑化氢的ＲＯＳ浓度会增加三倍［５］。在大多数的癌细胞中过氧化氢生成率很高，通常发逦－逡逑现高达０．５邋ｎｍｏｌ／１０４细胞／ｈ【吹并且刺激多核白细胞１．５邋ｎｍｏｌ／１０４细胞／ｈ队吞嗟细逡逑胞相比其他细胞会产生和分泌高水平的Ｈ２０２。活化的中性粒细胞生成６ｘｌ0－１４邋ｍ0ｌ逡逑Ｈ２０２／ｈ／细胞，局部生成１０－１００0ｍＭ［８］。最近有报告称体内树突状细胞（ＤＣ）最有逡逑效的抗原呈递细胞（ＡＰＣ）中过氧化氢浓度可达１邋ｍＭ［９］。活性氧是一把双刃剑。逡逑生理状态下，低水平的活性氧是维持细胞正常功能所必需的，通过调节氧平衡参与逡逑各种信号通路，细胞通过抗氧化物质保持ＲＯＳ的平衡；在炎症产生时诱导细胞发生逡逑氧化应激
水平也无法生存，许多癌细胞通过激活ＧＳＨ或其他抗氧化分子来激活ＲＯＳ防御机逡逑制。因此X椉酉赴冢遥希油ü种瓶寡趸芰蛘咄卑邢颍牵樱群停遥希右彩茄″义显裥陨鄙酥琢龅牟呗裕ㄍ迹保常ｅ义希瑰义
本文编号：2685324
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/2685324.html
最近更新
教材专著
