弓形虫超氧化物歧化酶（SOD）基因分析和克隆表达

发布时间：2017-03-26 10:00

  本文关键词：弓形虫超氧化物歧化酶（SOD）基因分析和克隆表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：刚地弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫,可以感染所有温血动物,包括人、家畜和海洋哺乳动物,引起人兽共患弓形虫病。在多数情况下,人感染弓形虫后没有明显的临床症状,但是当机体免疫低下时,弓形虫的感染可能会造成严重的后果。弓形虫严重威胁着人类健康和畜牧业的发展,已引起医学界和兽医界的高度重视。所以,对弓形虫与弓形虫病的研究具有十分重要的意义。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)广泛存在于多种生物体内,包括植物、动物、微生物等,在医学、食品业、工业上有潜在的利用价值。超氧化物歧化酶亦普遍存在于弓形虫中,以往的研究表明,超氧化物歧化酶可能在弓形虫的胞内生长中发挥重要作用。方法：分别对十个弓形虫虫株SOD基因进行PCR扩增,构建相应的重组克隆载体pEASY-SOD,经DNA测序,获得不同虫株来源的SOD基因序列；然后用限制性内切酶长度多态性分析分型法(PCR-RFLP)和生物信息学的方法对弓形虫SOD基因序列进行分析。同时,利用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pEGFP-SOD,经PCR、酶切与测序鉴定正确后,体外转染HEK 293T细胞,利用荧光显微镜、SDS-PAGE和Western Blotting检测蛋白表达。结果：十个不同虫株来源的弓形虫SOD基因序列大约1700bp, PCR-RFLP酶切的结果显示酶切片段是相同的；DNA测序结果显示十个SOD序列之间有43个碱基和24个氨基酸改变,变异度在0到1%之间；系统进化树结果显示10株弓形虫SOD序列可以大致分为两组,且各组间存在着很小的差异。上述结果表明弓形虫SOD具有高度保守性,可能是弓形虫DNA疫苗的靶点。另外,重组真核表达质粒pEGFP-SOD构建正确,经荧光显微镜、SDS-PAGE和Western blotting鉴定,弓形虫SOD基因可以在HEK293T细胞中瞬时表达,并且具有一定的免疫活性。结论：弓形虫SOD基因序列具有高度保守性,可能是弓形虫DNA疫苗的靶点；成功构建了重组真核表达质粒pEGFP-SOD,可在体外表达并有免疫活性,为后续进行弓形虫DNA疫苗实验奠定了基础。
【关键词】：刚地弓形虫 超氧化物歧化酶 PCR-RFLP 序列分析 真核表达载体 瞬时表达
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R382.5
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 主要符号说明11-12
• 前言12-14
• 第一部分 弓形虫超氧化物歧化酶(SOD)基因分析14-39
• 材料14-15
• 实验方法15-22
• 结果22-37
• 讨论37-39
• 第二部分 弓形虫SOD基因体外克隆表达与鉴定39-53
• 材料39
• 实验方法39-46
• 结果46-51
• 讨论51-53
• 参考文献53-57
• 附图157
• 附图257-58
• 致谢58-59
• 攻读硕士期间发表的论文59-60
• 学位论文评阅及答辩情况表60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 贾玉玺;聂大平;陈凌娟;李伟;申丽洁;;弓形虫基因分型研究进展[J];中国血吸虫病防治杂志;2013年02期

  本文关键词：弓形虫超氧化物歧化酶（SOD）基因分析和克隆表达，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：268612