在体骨细胞及其微环境的体外模拟与应用

发布时间：2020-05-29 16:49

【摘要】：目的建立相对静息状态下在体骨细胞的体外模型,体外模拟其体内生存的微环境,寻找骨细胞不同状态下的标志分子。方法1.采用I型胶原蛋白凝胶铺板,并接种成骨细胞系MC3T3-E1,进行成骨诱导;2.分别取诱导14天、21天、28天、35天的细胞凝胶层进行石蜡包埋切片;3.通过HE染色的方法观察细胞形态以及细胞间连接;4.通过免疫组化的方法检测成骨细胞标志物RUNX2以及骨细胞标志物DMP1的表达;5.应用该模型对骨细胞不同状态下的标志分子进行验证。结果1.在成骨诱导过程中,随着培养天数的增加,细胞进入凝胶的深度逐渐增加,且在第35天的HE染色切片中发现星状、骨细胞样细胞,且出现类似骨小管的小管状结构。在诱导14-28天时,凝胶层细胞表达RUNX2逐渐减弱,直至诱导35天,RUNX2不表达。在诱导第28天时,凝胶层细胞开始表达DMP1,并随诱导天数的增加,表达逐渐增强;2.在体骨组织切片中骨细胞不表达Notch1,体外骨细胞表达Notch1,而本骨细胞体外模型与在体骨组织切片中Notch1表达一致;3.成骨细胞系MC3T3-E1中,下调Notch2可使β-cantein及其下游靶基因Notch1以及Notch2本身的下游靶基因NFATc1表达增加,进而影响骨重建;4.骨细胞系M LO-Y4中,下调Notch1可降低Notch2影响骨重建。结论1.成功的建立了相对静息状态下在体骨细胞的体外模型并能在体外模拟其体内生存的微环境2.Notch1可作为判断骨细胞不同功能状态的标志分子3.Notch1、Notch2相互作用影响骨重建
【图文】：

图 1-1 I 型胶原中培养成骨细胞系 MC3T3-E1 的整体实物图从 I 型胶原中培养成骨细胞系 MC3T3-E1 的大体观中发现，，随着培养天数的增加，含有 MC3T3-E1 的凝胶受细胞的牵拉逐渐固缩。0 天 1421 天 28 天天35 天

10图 1-2 I 型胶原中成骨细胞系 MC3T3-E1 的微观形态学观察采用 HE 染色的方法，在镜下观察 I 型胶原中成骨细胞系 MC3T3-E1 的微观形态，发现随着培养天数的增加，细胞进入凝胶的深度逐渐增加，且在第 35 天的 HE 染色切片中发40X 40X 40X
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2

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本文编号：2687215