高原脑水肿大鼠模型的建立及5,6,7,8-四羟基黄酮的干预作用

发布时间：2020-06-12 00:20

【摘要】：目的:1.建立并评价实验性高原脑水肿大鼠模型。2.探讨5,6,7,8-四羟基黄酮对高原脑水肿大鼠的干预作用及初步作用机制。方法:1.雄性Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组(Control),低压低氧组(HH),低温低压低氧组(HH+2℃),温差低压低氧组(HH+12/2℃),除Control组外,其余各组根据不同的条件将大鼠置于低压氧舱模拟海拔6000 m高原暴露72 h,通过大鼠体重、脑组织含水量、血脑屏障通透性的变化以及HE染色结果初步筛选出高原脑水肿模型;通过氧化应激、能量代谢指标以及炎症因子、AQP4、VEGF的表达进一步明确最佳模型。2.采用小鼠常压密闭缺氧耐力实验和小鼠急性减压耐力实验研究5,6,7,8-四羟基黄酮低、中、高剂量组的抗缺氧活性,确定最佳给药剂量;将Wistar雄性大鼠随机分为4组:正常对照组(Control),高原脑水肿模型组(HACE),乙酰唑胺组(ACZ),5,6,7,8-四羟基黄酮组(THF),除Control组外,HACE组、ACZ组、THF组于当地海拔灌胃给药3天后置于低压氧舱模拟海拔6000m继续给药3天,观察脑组织病理结构改变,检测脑含水量、EB含量、相关生化指标、基因和蛋白表达。3.采用八臂迷宫实验探究5,6,7,8-四羟基黄酮对HACE大鼠认知能力的影响。将训练成功的Wistar雄性大鼠随机分为3组:正常对照组(Control),高原脑水肿模型组(HACE),5,6,7,8-四羟基黄酮组(THF),重复大鼠急性减压实验,于实验第7天采用八臂迷宫进行行为学测定,分别记录WME,WMEF,RME,RMEF,TE,TT,每只大鼠进行两次测定,取平均值,评价5,6,7,8-四羟基黄酮对HACE大鼠学习记忆的保护作用。结果:1.与Control组和其他低氧组相比,HH+12/2℃组大鼠体重下降最为明显,脑含水量和EB含量显著增加,HE染色观察到脑组织明显的病理改变,因此初步筛选出HH+12/2℃组为高原脑水肿模型;此外,通过氧化应激、能量代谢指标、炎症因子、AQP4、VEGF的表达进一步验证模型的最佳性,结果发现HH+12/2℃组O2-·,H2O2,MDA,LD,LDH,丙酮酸和PK含量或活力升高(P0.05或P0.01),SOD,CAT,GSH-PX,GSH-ST,Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性和GSH含量显着降低(P0.05或P0.01),大鼠血清中NFκB-p65,IL-6,IL-1β和TNF-α浓度显著增加(P0.05或P0.01),与脑水肿密切相关的AQP4和VEGF表达水平显著增高(P0.01),以上结果进一步明确HH+12/2℃为最佳的高原脑水肿建模条件。2.小鼠常压密闭耐力实验和急性减压耐力实验结果表明:5,6,7,8-四羟基黄酮高剂量组(500 mg/kg)的抗缺氧效果最佳,故后期实验选用高剂量进行给药,通过大小鼠种属间等效剂量换算得到大鼠给药剂量为350 mg/kg;急性减压大鼠实验表明:5,6,7,8-四羟基黄酮可以明显降低高原脑水肿大鼠脑组织含水量和脑通透性,改善脑组织病理变化,此外,5,6,7,8-四羟基黄酮能够降低O2-·,H2O2,MDA,LD,LDH,PK水平(P0.05或P0.01),增强SOD,GSH-PX,GSH-ST,Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活力和GSH含量(P0.05或P0.01),降低氧化应激,通过下调NFκB-p65的含量,减少炎症因子IL-6,IL-1β和TNF-α的分泌和AQP4的表达(P0.05或P0.01),此外,低氧信号通路的关键因子HIF-1α蛋白和基因表达下调(P0.05),其下游相关蛋白和基因VEGF、MMP-9表达减少(P0.05或P0.01)。3.与Control组相比,HACE组大鼠无论是短期记忆错误(WME,WMEF)还是长期记忆错误(RME,RMEF)都显著增加(P0.01),探究总时间(TT)和错误总次数(TE)也显著性延长(P0.01),而经THF之干预后,WME,WMEF,RME,RMEF,TT,TE显著性降低(P0.05或P0.01)。结论:1.确定建立实验性大鼠高原脑水肿模型的最佳条件为6000 m结合寒冷条件下的昼夜温差(12/2℃)。2.5,6,7,8-四羟基黄酮具有良好的抗缺氧作用,且高剂量(350 mg/kg)抗缺氧活性最佳;5,6,7,8-四羟基黄酮对预防高原脑水肿具有良好的作用,其作用机制主要是通过降低机体氧化能力、提高抗氧化能力,缓解氧化应激,同时通过NFκB途径,降低炎性反应,减少下游水通道蛋白AQP4的表达,降低脑含水量,维持血脑屏障通透性,改善脑组织病理形态;此外,5,6,7,8-四羟基黄酮能够下调低氧信号通路中的关键因子HIF-1α蛋白及其下游相关蛋白VEGF、MMP-9表达,降低血管通透性,保护血脑屏障,从而预防高原脑水肿的发生。3.5,6,7,8-四羟基黄酮对HACE所致的学习记忆功能缺陷有一定的改善作用。
【图文】：

6,7,8-四羟基黄酮化学结构式术路线进展迅速，死亡率高，，其分子机制而目前国内外尚无公认理想的 HAC制。因此本文立足于影响 HACE 的方式以及寒冷等来建立实验性 HAC以 10 m/s 速度急进至海拔 6000 m 温、2℃、12/2℃（8:00-20:00 为 12血脑屏障通透性和 HE 染色作为判定模型，通过以生化指标、蛋白表达E 大鼠模型。

学硕士研究生学位论文 高原脑水肿大鼠模型的建立及 5,6,7,8-四羟基黄酮的干迷宫通过对 HACE 大鼠短时记忆、长时记忆以及总探究时间等的分析从行为学角度阐述了 5,6,7,8-四羟基黄酮对 HACE 大鼠认知能力的保 技术路线本文技术路线图如图1-2、1-3所示。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332

【参考文献】

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