TNF-α诱导人间充质干细胞炎症相关因子表达上调及其分子机制

发布时间：2020-06-15 20:49

【摘要】：目的:探讨TNF-α作用于3种不同组织来源的人MSC炎症相关因子表达上调及其分子机制。方法:针对志愿者提供的人脐带、骨髓、脂肪源MSC,分别采用5、10、20 ng/ml TNF-α干预细胞不同时间后,采用定量RT-PCR和Western blot分析IL-8、MCP-1、GRP78、eIF2a、CHOP、NF-κB的基因表达,ELISA检测细胞上清可溶性IL-8、MCP-1的分泌量,并分析salubrinal、PDTC预处理后,内质网应激蛋白、NF-κB信号分子及IL-8、MCP-1蛋白表达水平。结果:不同浓度TNF-α引起3种不同来源MSC的IL-8、MCP-1 mRNA含量不同程度的增加(其中10 ng/ml TNF-α分别干预UCMSC、BMMSC、ADMSC 48 h后,使得细胞因子分别上升至对照组的59、328、506倍和3.7、132、521倍),两者的细胞蛋白表达量明显增加,同时TNF-α(10 ng/ml)还导致MSC可溶性的IL-8、MCP-1蛋白分泌量明显升高(3种MSC的细胞因子分别上升至对照组的 1.7、11.4、7.7 倍和 5.7、4.8、5.5 倍,P 值均0.001)。TNF-α 刺激后,引起MSC内质网应激蛋白GRP78、CHOPmRNA含量增加,但并未引起XBP-lsmRNA含量改变;还导致 GRP78、GRP94、eIF2a、CHOP、cleaved Caspase-3 蛋白表达升高,且salubrinal能抑制eIF2a、CHOP蛋白表达增高的趋势,同时抑制IL-8、MCP-1细胞蛋白表达和可溶性IL-8、MCP-1分子分泌量的增加。TNF-α能够激活MSC的NF-κB信号通路,经PDTC预处理不仅抑制NF-κB的磷酸化,且同时抑制IL-8、MCP-1细胞蛋白表达和可溶性IL-8、MCP-1分子分泌量的增加;salubrinal还能抑制NF-κB磷酸化水平,抑制NF-κB信号通路。结论:TNF-α作用于3种不同来源人MSC可引起炎症相关因子分泌量的增加,并且随着时间和浓度的增加而增加。TNF-α激活MSC的内质网应激eIF2a/CHOP通路和NF-κB信号通路,导致IL-8、MCP-1细胞蛋白表达和可溶性IL-8、MCP-1分泌量的增加。TNF-α通过增强人UCMSC的eIF2a磷酸化而抑制NF-κB的磷酸化蛋白生成,部分降低IL-8、MCP-1的转录表达。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2
【图文】：

ＨＬＡ－ＤＲ呈阴性表达。同时３种ＭＳＣ的ＣＤ１３、ＨＬＡ－ＡＢＣ均为阳性表达，ＣＤ３１逡逑为阴性，ＣＤ１４６的表达略有差别，其中ＵＣＭＳＣ呈弱阳性，而ＢＭＭＳＣ和ＡＤＭＳＣ逡逑为阴性（见表１、图１）。逡逑表１．３种不同来源人ＭＳＣ流式检测结果逡逑ＣＤ邋抗原名称邋ＵＣＭＳＣ（°／。）邋ＢＭＭＳＣ（％）邋ＡＤＭＳＣ（％）逡逑ＣＤ７３逦９９．６逦９９．６逦９５逡逑ＣＤ９０逦１００逦９９．８逦９７．７逡逑ＣＤ邋１０５逦９５．６逦９４．５逦９７．３逡逑ＣＤ３４逦０．１逦０．２逦０．２逡逑ＣＤ４５逦０．１逦０．２逦０．１逡逑ＣＤ１９逦０．２逦０．２逦０．１逡逑ＣＤ１４逦０．１逦０．１逦０．１逡逑ＨＬＡ－ＤＲ逦０．１逦１．７逦１．２逡逑ＨＬＡ－ＡＢＣ逦５６．８逦７７．４逦６１．８逡逑ＣＤ１３逦９８．５逦９９．７逦９９．７逡逑ＣＤ３１逦０．２逦０．４逦０．６逡逑ＣＤ１４６逦５５．２逦７．４逦０．４逡逑２４逡逑

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本文编号：2714976