无菌大鼠深二度烫伤模型的建立及机体炎性反应的研究

发布时间：2020-06-15 21:41

【摘要】：目的:利用SPF级Wistar大鼠,通过剖腹产与人工无菌饲喂技术获得无菌大鼠。利用无菌大鼠分别建立深二度烫伤损伤模型和绿脓杆菌感染模型,比较这两种模型和SPF级大鼠模型在愈合过程、炎性反应、病理变化等方面的异同,探讨烧伤过程中机体炎症反应对烧伤愈合的影响。内容:大鼠隔离器放置于屏障环境中,利用15%过氧乙酸按照7m L/m3加水7m L熏蒸消毒2h,获得无菌饲养环境。将SPF级Wistar大鼠在无菌环境下剖腹产,获得无菌乳鼠,利用经消毒处理的人工乳进行人工饲喂至乳鼠独立饮食。繁育子一代后,进行母乳喂养。利用子一代6周龄无菌大鼠,采用恒温恒压烫伤仪造成深二度烫伤,建立烫伤大鼠模型。将烫伤的无菌大鼠随机分为两组,一组在伤口处感染浓度为1×105CFU/m L的绿脓杆菌,一组不做处理,设立SPF级烫伤大鼠作为对照,比较三组大鼠的愈合过程、炎性反应和病理变化等,分析烧伤过程中机体炎症反应对烧伤愈合的影响。方法:10周龄SPF级Wistar大鼠按照雌雄比2:1合笼,隔夜早上检查阴栓,见栓者(见栓当天记孕0天)独立饲养,怀孕21天大鼠在大鼠隔离器内剖腹产,获得无菌乳鼠。乳鼠出生后14天内,每天利用人工乳灌胃6次,15~21天,每天灌服4次人工乳,直至乳鼠能独立饮食。在乳鼠的生长过程中,传入隔离器内的任何物品均经消毒使用,饲料、饮水、手术器械、饲养笼盒及烧杯等经121℃30min高压蒸汽灭菌,羊乳、婴儿配方奶粉、新生牛血清采用60Co照射灭菌消毒后经传递窗传入隔离器内。采用脑心浸液肉汤培养基、硫乙醇酸钠培养基及血平皿,对剖腹产过程中冲洗孕鼠的胚胎、子宫所用的无菌生理盐水,在37℃恒温培养箱中培养14天,无细菌检出;大豆蛋白胨肉汤培养基在26℃恒温培养箱中培养7天,无真菌检出。每隔两周对乳鼠粪便稀释液、咽拭子,以及隔离器环境进行检测,均无细菌检出。十周后进行交配,子一代乳鼠进行细菌检测也未有细菌检出,获得无菌大鼠。6周龄子一代雌性无菌大鼠,体重160~180g,在超净工作台内采用恒温恒压烫伤仪94℃,8s,压力500g造成大鼠深二度烫伤,随机分为两组,一组在伤口感染绿脓杆菌菌液,一组不做处理,创面保持无菌状态,另做一组用SPF级wistar大鼠在同样条件下烫伤,创面不做处理。分别观察三组大鼠的伤口结痂时间、脱痂时间和愈合时间,并在烫伤后24h、3天和7天,取血清,检测炎性因子GM-CSF、IL-1α、TNF-α的变化,取皮肤、肺、胰腺、肝、肾组织固定在4%甲醛溶液中,用做组织病理,并在烫伤后7天利用平板记数法测定伤口菌群数量。结果:1成功获得无菌大鼠,且具有生育传代能力。2建立了无菌大鼠的深二度烫伤模型3三组大鼠愈合情况染绿脓杆菌无菌大鼠与对照组比较,开始结痂所需时间更长,且具有显著性差异(P0.05);脱痂时间及愈合时间与无菌大鼠烫伤大鼠比较,反而较短,且具有显著性差异(P0.05)。4三组烫伤大鼠炎症反应4.1血清中炎性因子TNF-α水平变化三组烫伤大鼠与未烫伤起始状态比较,血清TNF-α水平均显著升高,且有显著性差异(P0.05);烫伤24h时,血清TNF-α水平有显著性差异(P0.05),染绿脓杆菌无菌大鼠组显著低于SPF级大鼠组和无菌大鼠组。4.2血清中炎性因子GM-CSF水平变化三组烫伤大鼠与未烫伤起始状态比较,血清GM-CSF水平均显著升高,且有显著性差异(P0.05);烫伤大24h时,血清GM-CSF水平有显著性差异(P0.05),无菌大鼠组显著高于SPF级大鼠组和染绿脓杆菌无菌大鼠组;3天时,血清GM-CSF水平有显著性差异(P0.05),无菌大鼠组显著高于染绿脓杆菌大鼠组;7天时,血清GM-CSF水平有显著性差异(P0.05),无菌大鼠组显著低于SPF级大鼠组和染绿脓杆菌大鼠组。4.3血清中炎性因子IL-1α水平变化三组烫伤大鼠与未烫伤起始状态比较,血清IL-1α水平均显著升高,且有显著性差异(P0.05);烫伤24h时,血清IL-1α水平有显著性差异(P0.05),染绿脓杆菌无菌大鼠组和无菌大鼠烫伤组显著高于SPF级大鼠烫伤组;3天时,血清IL-1α水平有显著性差异(P0.05),染绿脓杆菌无菌大鼠组和无菌大鼠组显著高于SPF级大鼠烫伤组。5病理变化病理切片显示烫伤后一周内三组大鼠的肝、肾、肺均有炎性细胞浸润,嗜酸性增强、出血等反应,但没有明显的差异。染绿脓杆菌无菌大鼠24h时,皮下组织中可见淋巴细胞,有慢性炎性反应;3天时,真皮深层,有化脓性感染,横纹肌周围可见大量炎细胞;7天时,有轻微血管扩张充血,化脓性感染减轻,无菌烫伤大鼠与SPF级烫伤大鼠皮肤在烫伤后一周内有轻到中度炎性反应,没有明显的差别。结论:1采用剖腹产净化SPF级大鼠可以获得无菌大鼠,且具有生育能力。2采用创新的烫伤方法可以获得深二度烫伤模型。3深二度烫伤后,无菌大鼠对于烫伤刺激反应激烈,血清中炎性因子迅速升高,SPF级大鼠由于自身携带菌群,机体免疫系统相对稳定,与无菌大鼠比较,对小面积的深二度烫伤炎性反应,反应较慢。4无菌大鼠小面积深二度烫伤伤口感染1×105CFU/m L的绿脓杆菌菌液与未感染绿脓杆菌无菌烫伤大鼠和SPF级烫伤大鼠比较,缩短了脱痂时间和愈合时间。
【学位授予单位】：军事科学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R644;R-332
【图文】：

图 1 培养基配制及隔离器沉降菌检测.4 隔离器内饮水、羊乳、奶粉和新鲜动物粪无菌检测将无菌隔离器内饮水、饲料、羊乳、奶粉等分别收集于经高压蒸汽灭菌 离心管中，密封后经传递窗传出大鼠隔离器。将已灭菌的硫乙醇酸钠培养基浸液肉汤和大豆蛋白胨肉汤加热煮沸至无色，置 45℃水浴箱平衡温度。

图 2 人工饲养乳鼠生长情况乳鼠在 9 日龄时，生长状态良好，十天之后，开始消瘦，但体重仍持续增长， 21 天离乳时，体重达到 22～26g。乳鼠生长曲线

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 孙堂卿;黄国宝;杨涛;张磊;吴秋合;;磨痂术对烫伤大鼠术后创面铜绿假单胞菌感染的干预作用研究[J];中华医院感染学杂志;2017年22期

2 刘p芸

本文编号：2715037