GIT1对骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化的影响及机制研究

发布时间：2020-06-16 23:08

【摘要】：目的:已有研究表明GIT1对小鼠肺部及骨折愈合过程中血管形成具有重要影响,GIT1缺失可以导致肺部发育及骨折愈合障碍,但其机制尚不完全清楚。本研究通过对野生型及GIT1基因敲除型小鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化过程进行比较,探索GIT1影响血管形成的机制。方法:GIT1杂合子小鼠雌雄配对饲养,对2代新生小鼠采用PCR法行基因型鉴定。分别取GIT1野生型与GIT1基因敲除型小鼠分离培养的2代BMSCs,各分为两组,一组加内皮细胞诱导液培养作为实验组,另一组进行常规传代培养作为对照组;故实验分为4组,分别为野生型对照组(A组)、野生型实验组(A1组)、基因敲除型对照组(B组)、基因敲除型实验组(B1组)。Western blot检测各组细胞VEGF受体2(VEGF receptor 2,VEGFR2)、VEGFR3、磷酸化VEGFR2(phospho-VEGF receptor 2,pVEGFR2)、pVEGFR3表达;流式细胞仪检测各组内皮细胞标志物血管性血友病因子(von Willebrand Factor,vWF)、血小板内皮细胞粘附因子-1(platelet-endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1)、血管内皮粘钙蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-Cadherin)表达。取野生型小鼠二代BMSCs,根据加入培养液的不同分为4组:Ⅰ组,原细胞培养液;Ⅱ组,细胞培养液中加入VEGFR-3阻断剂SAR131675;Ⅲ组,加入内皮细胞诱导液;Ⅳ组,内皮细胞诱导液中加入SAR131675。流式细胞仪检测各组内皮细胞标志物vWF、PECAM-1、VE-Cadherin表达。结果Western blot检测示,Western blot检测示,4组细胞的VEGFR-2、pVEGFR-2蛋白表达无明显差异,A1组VEGFR-3、pVEGFR-3蛋白表达显著高于其余3组。流式细胞仪检测示,A1组vWF、PECAM-1及VE-Cadherin表达均显著高于A、B、B1组,B1组显著高于A、B组(P0.05);A、B组间比较差异无统计学意义(P0.05)。阻断VEGFR-3实验中流式细胞仪检测示,Ⅲ组vWF、PECAM-1及VE-Cadherin表达均显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ组,Ⅳ组高于Ⅰ、Ⅱ组(P0.05);Ⅰ、Ⅱ组间差异无统计学意义(P0.05)。结论:GIT1通过VEGFR-3对骨髓间充质干细胞向内皮细胞分化产生影响。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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本文编号：2716725