醛酮还原酶AKR7A3在肝细胞中的表达及性质研究

发布时间：2020-06-17 01:35

【摘要】：AKR7A3属醛酮还原酶(AKR),是NADPH依赖型的氧化还原酶超家族当中的一种。AKR7A3在体内参与了很多极为重要的体内生理活动,比如说激素合成、药物排出体外、炎症反应以及解毒过程中有着不可忽视的作用。AKR7A3在肝、肾和子宫等器官发生癌变的过程中表达量有变化。作为黄曲霉毒素解毒酶被人们广泛所了解。文献表明AKR7A3和肝癌的发生发展有着一定关联性。本文以AKR7A3做研究对象,构建AKR7A3-pET-15b表达载体,使用大肠杆菌BL21原核表达醛酮还原酶AKR7A3,对表达条件进行相应优化,并测定原核表达蛋白的有关活性。建立AKR7A3小鼠多抗体模型,获得多克隆抗体。选用肝细胞HL-7702和肝癌细胞HepG2细胞株,利用ELISA、RT-PCR等技术,在细胞中从蛋白质以及核酸分子表达水平上,探索该酶和肝癌之间的关系。实验结果表明:原核表达出了大量高纯度的有生物活性的人源AKR7A3蛋白,并优化条件,结果为温度16℃、转速110 rpm/h、时间20 h,IPTG浓度1.00 mM/L。免疫的活体动物得到了相应的AKR7A3多克隆抗体。该种酶在两种细胞中表达的测定结果为:蛋白质水平上肝细胞是肝癌细胞的2.1倍;核酸水平上肝细胞是肝癌细胞的2.84倍。
【学位授予单位】：长春理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R363
【图文】：

BL21-pET15b-AKR7A3质粒鉴定M为Marker,1泳道为空pET15b质粒，其余泳道为提取质粒

AKR7A3蛋白表达SDS-PAGE电泳图

【参考文献】

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本文编号：2716886