无细胞百日咳组份疫苗脱毒及去脱毒剂工艺研究

发布时间：2017-03-28 06:11

  本文关键词：无细胞百日咳组份疫苗脱毒及去脱毒剂工艺研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：百日咳是由百日咳杆菌感染引起的急性传染病,无细胞百日咳疫苗是控制百日咳病菌传播的有效方法。无细胞百日咳疫苗是通过纯化工艺,提取细菌中具有免疫原性的抗原成分,去除无免疫原性并且引起不良反应的毒性物质。这些具有高免疫原性的组份包括百日咳毒素(pertussis toxin PT)、丝状血凝素(filamentous haemagglutinin FHA)、百日咳杆菌黏着素(PRN)。对用柱色谱纯化的方法,纯化出的三种不同的抗原,用不同的脱毒剂和不同的脱毒方法对三种有效组份百日咳毒素,丝状血凝素和百日咳杆菌黏着素分别进行脱毒,保留其组份的免疫原性并去除其致病毒性,之后以有效的方法去除对人体有害的脱毒剂,按比例合并,经检测合格,即成本文中所提及的无细胞百日咳组份疫苗。脱毒是去除百日咳毒素毒性,保留其生物原性的关键步骤,此项研究对生产高效力高安全性的百日咳疫苗具有重要意义。各组分脱毒后去除脱毒剂的效果,影响着组分疫苗的效力和安全性。对无细胞百日咳组份疫苗生产过程中三种抗原纯化液百日咳毒素,丝状血凝素,百日咳杆菌黏着素各自的不同的脱毒条件的研究,脱毒后的百日咳毒素,丝状血凝素,百日咳杆菌黏着素纯化液进行去脱毒剂方法的研究是本文的主要内容。本研究就百日咳毒素纯化液,丝状血凝素纯化液,百日咳杆菌黏着素纯化液分别用不同方法进行脱毒,检测脱毒后脱毒液的毒性效果,并对经过不同脱毒方法脱毒后的组份进行配比,成百日咳组份疫苗原液后进行全检。根据不同检测结果,确定三种组分的脱毒方法分别为:百日咳毒素纯化液经PBS,甘油稀释后,用戊二醛、天冬氨酸盐脱毒,为百日咳毒素脱毒液;丝状血凝素纯化液用PBS稀释后,加甘氨酸、甲醛脱毒,为丝状血凝素脱毒液;百日咳杆菌黏着素纯化液用碳酸盐缓冲液稀释后,加入戊二醛、L-赖氨酸脱毒,为百日咳杆菌黏着素脱毒液。本文就脱毒后的纯化液进行透析和超滤两种不同方法的去脱毒剂,之后进行检测,无菌结果显示超滤方法更能保证无菌;戊二醛,甲醛等脱毒剂残余量,差别不大。且出于人力物力时间成本考虑,超滤都是更优选择。根据以上脱毒方法进行脱毒,之后用超滤法去除脱毒剂,可行。生产出的无细胞百日咳组份疫苗合格。
【关键词】：无细胞百日咳组份疫苗 脱毒 去脱毒剂
【学位授予单位】：北京理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 注释说明汇集表9-12
• 第1章 绪论12-22
• 1.1 百日咳简介12-17
• 1.2 百日咳疫苗17
• 1.3 百日咳疫苗的种类及研究现状17-20
• 1.3.1 全细胞百日咳疫苗17-18
• 1.3.2 无细胞百日咳疫苗18-19
• 1.3.3 基因工程疫苗19-20
• 1.4 组份疫苗研究的目的意义及主要内容20-22
• 第2章 实验22-29
• 2.1 仪器22
• 2.2 试剂与材料22-23
• 2.2.1 试剂溶液22-23
• 2.2.2 菌种23
• 2.3 溶液制备23-24
• 2.4 供试品制备24
• 2.4.1 细菌培养24
• 2.4.2 粗纯24
• 2.4.3 精制24
• 2.5 脱毒24-26
• 2.5.1 百日咳毒素脱毒25
• 2.5.2 丝状血凝素脱毒25
• 2.5.3 百日咳杆菌黏着素脱毒25-26
• 2.6 透析法去除脱毒剂26
• 2.6.1 透析法去除百日咳毒素脱毒剂26
• 2.6.2 透析法去除丝状血凝素脱毒剂26
• 2.6.3 透析法去除百日咳杆菌黏着素脱毒剂26
• 2.7 超滤法去除脱毒剂26-27
• 2.7.1 超滤法去除百日咳毒素脱毒剂26-27
• 2.7.2 超滤过程脱毒剂浓度检测27
• 2.7.3 超滤法去除丝状血凝素、百日咳杆菌黏着素脱毒剂27
• 2.8 配制吸附无细胞百日咳疫苗样品27-29
• 第3章 结果与讨论29-42
• 3.1 脱毒方法29-33
• 3.1.1 百日咳毒素脱毒30-32
• 3.1.2 丝状血凝素脱毒32-33
• 3.1.3 百日咳杆菌黏着素脱毒33
• 3.2 去脱毒剂方法33-39
• 3.2.1 透析法去脱毒剂34-36
• 3.2.2 超滤法去除脱毒剂36-39
• 3.3 百日咳疫苗样品的质量评价39-42
• 第4章 结论42-44
• 参考文献44-48
• 附录和清单48-62
• 附录A 无细胞百日咳（组份）疫苗原液制造及检定规程48-54
• 附录B 无细胞百白破（组份）B型流感嗜血杆菌联合疫苗使用说明书54-57
• 附录C CHO细胞检测活性PT含量方法57-62
• 致谢62

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本文编号：271793