KCNE1L参与抗一型单纯疱疹病毒的天然免疫反应和调节TNFα介导的IL-8基因表达

发布时间：2020-06-20 04:08

【摘要】：研究目的KCNE1L属于KCNE家族,是钾离子通道辅助蛋白。以往对其功能的研究主要聚焦在心律失常的相关性上。我们的前期研究发现,该基因在特异性皮炎并发扩散性单纯疱疹病毒感染患者的外周血单核淋巴细胞中表达显著减少,这一现象的生物学意义尚不明确。本课题的研究目的是研究KCNE1L在抗单纯疱疹病毒天然免疫反应和炎症反应中的作用。研究方法通过转染真核表达质粒过表达KCNE1L和转染短发夹RNA抑制KCNEIL基因表达,研究KCNE1L对单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV-1)的复制的影响。我们用实时定量PCR和空斑实验来检测HSV-1病毒的复制。我们还使用了免疫共沉淀检测KCNE1L与抗病毒天然免疫反应信号通路上的重要蛋白的相互作用,并用共聚焦免疫荧光技术检测KCNE1L蛋白的细胞器定位。我们用实时定量PCR和ELISA的方法检测了IFNα,IFNβ,TNFα和IL-29基因表达。我们还在293T细胞中过表达KCNE1L后,使用不同浓度肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNFα)刺激,用实时定量PCR检测IL-8细胞因子的表达量。研究结果1、过表达KCNE1L显著抑制HSV-1病毒复制。用shRNA抑制KCNE1L基因表达后,HSV-1病毒复制显著增加。2、过表达KCNE1L促进HSV-1诱导的IL-29、TNFα的基因表达;而用shRNA抑制KCNE1L基因表达后,HSV-1诱导的IL-29和TNFα基因表达量显著减少。HSV-1诱导的一型干扰素表达不受KCNE1L的调节。3、KCNE1L与IRF7相互作用。KCNE1L增强IRF7诱导的IL-29的基因表达。4、过表达KCNE1L增强TNFα(50ng/mL)诱导的IL-8基因表达。5、KCNE1L定位于线粒体和高尔基体。在TNFα的刺激下,KCNE1L从细胞质转运到细胞核定位。研究结论KCNE1L抑制单纯疱疹病毒-1的复制,调节三型干扰素IL-29基因表达。KCNE1L还参与TNFα诱导的IL-8基因表达,因此可能参与TNFα介导的炎症反应。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392
【图文】：

KCNE1L抑制HSV-1复制

相互作用,互作,细胞质,病毒

26图 3. KCNE1L 与 IRF7 的相互作用及其共定位。A：KCNE1L 与多个病毒相关重要分子的互作情况；B：KCNE1L 与 IRF7 共定位于细胞质；C：1ug/mL poly(I:C)刺激下 KCNE1L 与 IRF7 共定位于细胞核。Figure3. The interaction between KCNE1L and IRF7 and their co-localization. A: theinteraction between KCNE1L and several virus-related important molecules. B:

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