抑郁症气虚证候易感小鼠模型的方药反证与分子信号研究

发布时间：2020-06-25 04:24

【摘要】：现代医学对抑郁症的治疗效果并不令人满意,未针对疾病的异质性进行区分治疗可能是其原因之一。而中医是倡导个性化治疗的医学,对抑郁症的表现差异用“证候”区分,选用对证的方药进行治疗,在临床上治疗疾病效果良好。我们前期发现在同一抑郁症造模条件下Balb/c小鼠产生品系特异性的气虚样证候,本研究重点观察补气经方四君子汤与理气方越鞠丸对经历慢性不可预知轻度应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)后的该品系小鼠的抗抑郁作用和对中医证候的改善作用,反过来验证其抑郁症的证候,并探讨药物作用于抑郁症气虚易感模型的分子机制。目的:1.重点对Balb/c(B/c)雄性小鼠在CUMS下的抑郁症气虚证候表现进行方药反证并对比近交系129/S1(129S)小鼠,从PKA-CREB信号通路探讨病证相关神经与外周的分子生物学基础。2.从性别差异上验证Balb/c模型小鼠的抑郁症证候的稳定性。3.探讨补气药四君子汤对Balb/c模型小鼠的防治作用。方法:与研究目的相对应,本实验包括三个部分:1.给予Balb/c和129/S1雄性两品系小鼠慢性不可预知轻度应激(CUMS)诱导构建抑郁症疾病模型,连续造模4周,空白组(CTL)不给予任何刺激。通过蔗糖消耗测试(Sucrose preference test,SPT)、强迫游泳测试(Forced swim test,FST)评判其抑郁样疾病表现,通过抓力(Grip strength)、负重游泳(Loaded swim test)等测试等评判气虚样表现。将模型组随机分为模型对照(Veh)组、越鞠丸(Yueju,YJ)组、四君子汤(Sijunzi Decoction,SJZD)组和氟西汀(Fluoxetine,FLX)组。CTL和Veh组给予0.9%生理盐水灌胃。YJ组予0.2 g/mL的越鞠丸灌胃。SJZD组予0.5g/ml的四君子汤灌胃。FLX组予2mg/mL的氟西汀腹腔注射。给药1周后进行一系列行为学检测,通过评判药物的抗抑郁样作用和对气虚证候的改善作用来观测病证疗效。行为学检测结束后,取上述五组的小鼠海马和肌肉组织,用蛋白免疫印迹法(WestemBlotting,WB)检测海马和肌肉中PKA、p-CREB的蛋白表达情况。2.将B/c雌性小鼠随机分为空白对照组与模型组。空白对照组不予任何刺激,模型组给予慢性不可预知轻度应激4周,同方法一评判其抑郁样疾病表现和气虚样表现。将模型组随机分为2组:模型对照组与中药四君子汤组。给药1周后进行行为学检测,观测病证疗效,用蛋白免疫印迹方法检测这三组的海马与肌肉组织中PKA、p-CREB的表达变化。3.将B/c雄性小鼠随机分为空白组与模型组。空白对照组不予任何刺激。模型组给予慢性不可预知轻度应激,造模3周。同方法一评判其抑郁样疾病表现和气虚样表现。将空白组随机分为空白对照(CTL)组与空白+四君子汤(Control+SJZD,CS)组。将Balb/c小鼠的模型组随机分为4组,分别为Veh组、YJ组、SJZD组和FLX组。空白对照组和Veh组给予0.9%生理盐水灌胃。YJ组予0.2 g/mL的越鞠丸灌胃。SJZD组予0.5g/ml的四君子汤灌胃。FLX组予2mg/mL的氟西汀腹腔注射。给药1周后进行一系列行为学检测,通过评判药物的抗抑郁样作用和对气虚证候的改善作用来观测药物对模型的防治作用。结果:1.进行CUMS抑郁症造模后,B/c和129S两品系小鼠都产生了糖偏好下降,不动时间延长等相似的抑郁样行为。但两者的证候表现明显不同。B/c小鼠抑郁症则表现为气虚样证候,抓力、负重游泳时间、掌纹血色度均下降;129S小鼠的抑郁症不具有虚证表现,抓力与负重游泳时间无明显变化,掌纹血色度反而升高。理气药越鞠丸可改善129s小鼠的抑郁样表现,使糖偏好显著上升,缩短绝望不动时间和潜伏时间,改善皮毛评分,而补气药四君子汤则没有效果。在B/c小鼠上使用四君子汤比越鞠丸在改善抑郁表型上效果更好,两种方药都能改善糖偏好,强迫游泳和悬尾的不动时间,以及皮毛评分,但只有四君子汤能明显缩短潜伏时间。四君子汤还能改善B/c小鼠的抓力、负重游泳时长和掌纹血色度等气虚表型,而越鞠丸不能改善。从蛋白表达上看,四君子汤和越鞠丸均可逆转B/c小鼠肌肉和海马中的PKA和p-CREB蛋白表达的下调,而四君子汤效果更显著。越鞠丸可逆转129/S1模型肌肉和海马中下调的PKA和p-CREB,而四君子汤不能逆转其变化。2.B/c雌性小鼠在CUMS应激4周后出现糖偏好下降等抑郁样表现,和抓力下降、负重游泳时间减少的气虚样证候,四君子汤可逆转此变化而且逆转模型动物海马和肌肉PKA、p-CREB表达的下调。3.造模3周时,在B/c小鼠的不动时间尚无变化,抑郁表型尚未完全出现时给药,发现四君子汤可显著改善模型小鼠的糖偏好、不动时间和潜伏时间等抑郁表型,以及抓力、爪色等与气虚相关的表型,而越鞠丸组均不能改善。另外空白组与空白+四君子汤组的蔗糖消耗百分比、悬尾和强迫游泳测试的绝望不动时间、抓力、负重游泳时长、掌纹血色度均无显著差异。结论1.CUMS应激后Balb/c小鼠呈现为气虚样抑郁,补气药四君子汤可改善其证候表型,可能是通过上调PKA-CREB信号通路来实现。2.性别不影响抑郁症气虚模型的证候。3.CUMS应激3周后的Balb/c小鼠尚未完全出现抑郁表型,补气药四君子汤对其有预防作用。4.补气药四君子汤对无应激的Balb/c小鼠无抗抑郁及补气作用。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332
【图文】：

模型小鼠,抓力,证候,应激

鼠模型组的糖偏好显著下降ｂ＜０．００１），而１２９／Ｓ１小鼠模型组与空白组的糖偏好无显著差异逡逑（ｐ＞０．０５）。Ｂａｌｂ／ｃ模型小鼠的抓力第１２天、１７天、２２天均显著下降，而１２９／Ｓ１模型小鼠逡逑的抓力与空白对照组相比一直未出现显著差异。如图２－３。逡逑１７逡逑

抓力,品系,小鼠,蔗糖

逦Ｂ／Ｃ逦１２９Ｓ逡逑图２－２慢性不可预知温和应激４周后两品系小鼠的抑郁样行为和证候表型。逡逑Ｆｉｇ２－２邋Ｂ／ｃ邋ａｎｄ邋１２９Ｓ邋ｍｉｃｅ＇ｓ邋ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ－ｌｉｋｅ邋ｂｅｈａｖｉｏｒｓ邋ａｎｄ邋ｓｙｎｄｒｏｍｅ邋ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋４邋ｗｅｅｋ逡逑ＣＵＭＳ．逡逑注：与同品系对照组（ＣＴＬ）比，＞＜０．０５，＊＊＊ｐ＜０．００１逡逑Ｎｏｔｅ：ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＣＴＬ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｓａｍｅ邋ｓｔｒａｉｎ，＊ｍｅａｎｓｐ＜０．０５，＊＊＊ｍｅａｎｓ／？＜０．００１逡逑３．２在慢性不可预知温和应激中，两品系小鼠糖偏好与抓力的时程变化。逡逑我们监测了造模过程中两品系小鼠的糖水消耗百分比和抓力的时程变化。发现造模１３逡逑天时，与空白对照组相比Ｂａｌｂ／ｃ小鼠、１２９／Ｓ１小鼠模型组的糖水消耗百分比均显著上升逡逑（ｐ＜０．００１，；？＜０．０１），再过５天后糖偏好均显著下降（ｐ值均＜０．００１）。在第２３天时Ｂａｌｂ／ｃ小逡逑鼠模型组的糖偏好显著下降ｂ＜０．００１），而１２９／Ｓ１小鼠模型组与空白组的糖偏好无显著差异逡逑（ｐ＞０．０５）。Ｂａｌｂ／ｃ模型小鼠的抓力第１２天、１７天、２２天均显著下降，而１２９／Ｓ１模型小鼠逡逑的抓力与空白对照组相比一直未出现显著差异。如图２－３。逡逑１７逡逑

【参考文献】