磷酸钙纳米颗粒作为疫苗佐剂的应用与机制研究

发布时间：2020-06-26 12:46

【摘要】：磷酸钙纳米颗粒凭借其良好的安全性和生物学特性,被广泛地用于医学治疗和诊断领域。为了探索磷酸钙纳米颗粒作为疫苗佐剂的效果,本研究首先利用共沉淀的方式制备了八种不同磷钙比(P/Ca=0.15/0.30/0.45/0.60/0.75/0.90/1.00/1.10)的磷酸钙纳米颗粒,这些颗粒的大小均在10 nm～100 nm之间,并且随着P/Ca的增加,颗粒形态从近似球形状逐渐变成长条的棒状。其次,以VZVgE作为免疫原,在小鼠体内证实了磷酸钙纳米颗粒具有佐剂效应。同时通过体外细胞实验初步认为其可能是通过促进抗原提呈细胞-树突状细胞的增殖和吞噬抗原的能力,或者是通过促进巨噬细胞产生TNF-α来发挥佐剂效果。紧接着,为了提升磷酸钙纳米颗粒的佐剂效应,使其引发的免疫应答类型偏向于细胞免疫反应,本研究改变了磷酸钙纳米颗粒制备方法中磷元素的来源,用双膦酸盐(唑来膦酸和利塞膦酸)替代了 Na2HPO4·12H2O,制备了两种新型的颗粒:唑来膦酸钙和利塞膦酸钙。在小鼠体内评估实验中也证明了这两种颗粒具有更优的佐剂效应。最后,为了考察磷酸钙纳米颗粒作为佐剂在吸附颗粒抗原时是否会影响抗原的表位结构,本研究以HPV45 VLP作为模拟抗原进行考察,因此,本研究针对HPV45 VLP建立了一套免疫化学质量分析方法用于抗原表位的检测。实验结果表明磷酸钙纳米颗粒、利塞膦酸钙和唑来膦酸钙颗粒作为疫苗佐剂吸附HPV45 VLP抗原后,几乎不会影响HPV45 VLP表位的完整性。综上所述,经过一系列的实验验证,我们对磷酸钙纳米颗粒作为疫苗佐剂有了更深入的认识,这也为今后对其进行更加充分的研究和改造提供一定的基础。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392
【图文】：

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逦ＩＴｓ逦逡逑如硝酸钙溶液），另一种是含有磷酸根离子的水溶液（例如淲酸氢二胺）。为了使逡逑最终制备得到的磷酸钙纳米颗粒在各项性质中均具有较好的一致性（比如大小相逡逑近、形状相似，以及晶体或非晶体的性质保持一致），在两种反应试剂有效地混逡逑合时，控制好最适的反应条件（比如混合时环境的ｐＨ、温度、钙离子及磷酸根逡逑离子的浓度、搅拌速度和搅拌时间）１２＇图２显示的是磷酸钙纳米颗粒常用的制逡逑备工艺的简单示意图。这种制备工艺的一大优势就是在生产过程中不需要添加有逡逑机溶剂。最近，Ｃａｓｔｒｏ等人１５４１在一个规模较大的内消旋振荡流反应器中利用连续逡逑流沉淀法成功制备出了纳米大小的羟基磷灰石（主要成分为磷酸钙）。这种利用逡逑连续模式的制备方法有希望用于规模化的纳米大小、物理化学性质可控的羟基磷逡逑灰石的生产。逦？逡逑（逦＾逦ｒ逦＾逡逑

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ＡＰＣｓ）摄取并递呈，随后促进抗原被运输到引流淋巴结。虽然以磷酸钙纳米颗逡逑粒作为疫苗佐剂已经被广泛开发和测试，但是人们对其作为佐剂发挥作用的途径逡逑仍然不是很清楚。图３阐述的是磷酸钙纳米颗粒作为疫苗佐剂可能涉及的三种作逡逑用机制。逡逑３．１储存库效应逡逑对于疫苗佐剂的作用机制研宄，储存库效应应该是最早被提出来的一个说法。逡逑Ｇｌｅｎｎｙ等人［７＜］首先提出了铝盐佐剂发挥佐剂效应的作用机制是因为铝盐佐剂的逡逑储存库效应。颗粒样的材料基本上都能为抗原提供一个储存空间，随后不断释放逡逑出抗原，使抗原可以持续刺激机体的免疫系统，发挥更持久的免疫保护作用１７５］。逡逑目前也有许多佐剂，包括油包水乳液和纳米样颗粒，均被报道称其能协助抗原刺逡逑１０逡逑

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