富血小板血浆（PRP）促进新生乳鼠皮肤结构、屏障功能及毛囊发育研究

发布时间：2020-06-28 00:43

【摘要】：1.富血小板血浆(PRP)对新生乳鼠皮肤结构、屏障角质套膜发育的研究(1)背景皮肤是人体最大的器官,由表皮和真皮构成,皮肤是抵御外部环境损伤的第一道屏障。皮肤屏障功能中角质层(SC)是防止外源性刺激及抗原进入机体及体内水电解质丢失的主要屏障。然而角质层内形成的角质套膜(cornified envelope,CE),作为皮肤屏障的基础。婴幼儿皮肤约在三岁左右才完全达到成年人结构,同时较低的皮肤屏障功能,当收到外源性刺激时,更容易启发皮肤内源性免疫反应,及皮肤损伤,诱发一系列皮肤屏障功能障碍相关疾病的发生。临床上研究报道众多皮肤疾病发病机制与皮肤屏障功能下降、障碍相关。因此皮肤屏障相关研究越来越受到重视,增强皮肤屏障功能的治疗手段同时成为预防及治愈多种皮肤疾病发生的重点。PRP因其含有丰富的生长因子等,不仅可以增加肌肤含水量,同时能够加强皮肤对外界的免疫防护能力,减少外界物质对皮肤的刺激,使皮肤的状态恢复最佳。因此本研究采用初生C57BL/6乳鼠动物模型观察富血小板血浆(PRP)干预皮肤结构及皮肤屏障角质套膜的发育过程。(2)目标探讨富血小板血浆(PRP)在新生乳鼠毛囊发育过程中的影响。(3)方法与结果取新生C57BL/6乳鼠40只,随机分为富血小板血浆(PRP)实验组和生理盐水对照组,每组20只。在背部正中部位区域,实验组0.05ml血小板浓度为10~9/ml富血小板血浆单点皮内注射,对照组等量注射生理盐水。分别于第3d、5d、7d、10d时每组各取5只动物样本,进行全层皮肤组织石蜡包埋常规HE、Masson染色,免疫组化技术检测目的蛋白,对组织切片进行组织学观察拍摄,使用ImageJ软件测量皮肤灰度值及目的蛋白表达IOD值,ipp软件对真皮及表皮的厚度进行测量,spss统计软件对其数据进行分析计算。(4)结果PRP显著促进初生乳鼠皮肤组织结构表皮、真皮发育过程。同时PRP干预治疗明显促进早期角质形成细胞的增值与分化,并且PRP干预治疗使初生乳鼠皮肤组织早期兜甲蛋白(Ioricrin)、内披蛋白(Involucrin)表达量明显上调。(5)结论PRP对乳鼠早期表皮、真皮结构发育,及皮肤屏障功能趋向成熟完整的过程具有明显的促进作用。2.富血小板血浆(PRP)对新生乳鼠毛囊发育的研究(1)背景覆于体表的皮肤作为人体最大的器官,直接与所处的外界环境接触,是人体的天然外衣,对维持人体内环境稳定极为重要。具有屏障、吸收、感觉、分泌和排泄、体温调节、物质代谢、免疫等多种功能。毛囊是皮肤重要的附属器之一,其峡部的表皮干细胞是可以在生理状态下和创伤修复时为皮肤表皮组分提供细胞来源。脱发或突发是一种常见且难以治愈的疾病,可以在生命早期出现,而其治疗方案的选择有限。并且皮肤组织的创伤治疗或是再生修复发面,人们期望达到较完美修复,其中皮肤组织及其毛囊附属器官的发育过程研究越来越受到重视。富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)分泌多种生长因子、细胞因子和其它活性产物。临床研究表明,PRP可以用作皮肤创伤修复,减轻疼痛和减少瘢痕的增生。同时,PRP在皮肤屏障,色素代谢和附属器官汗腺、毛囊方面的研究越来越引起关注。本研究采用初生C57BL/6乳鼠动物模型进行富血小板血浆(PRP)干预其毛囊发育过程。(2)目标探讨富血小板血浆(PRP)在新生乳鼠毛囊发育过程中的影响。(3)方法与结果取新生C57BL/6乳鼠40只,随机分为富血小板血浆(PRP)实验组和生理盐水对照组,每组20只。在背部正中部位区域,实验组0.05ml血小板浓度为109/ml富血小板血浆单点皮内注射,对照组等量注射生理盐水。分别于第3d、5d、7d、10d时每组各取5只动物进行大体观察,并切取全层皮肤组织石蜡包埋常规HE、染色,对组织切片进行组织学观察拍摄,使用Image J软件测量皮肤灰度值,spss统计软件对其数据进行分析计算。(4)结果在第3、5、7 d时大体观察富血小板血浆组小鼠皮肤发育颜色的改变现象较对照组更早发生,其皮肤颜色灰度值检测统计结果与大体观察相符(P≤0.01),同时,第10 d时,大体观察发现富血小板血浆(PRP)组小鼠毛发的密度也明显高于对照组。HE染色结果显示PRP组的小鼠皮肤组织毛囊数量及在同天数毛囊的发育状态明显优于对照组。(5)结论富血小板血浆(PRP)有效促进毛囊的发育与成熟过程。
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R62;R-332
【图文】：

第一章 富血小板血浆（PRP）对新生乳鼠皮肤结构、屏障角质套膜发育的研究HE、Masson 染色：石蜡切片（5μm）厚切片，以 HE、Masson 染色试剂色，脱水封片。免疫组化染色：切片脱蜡、复水、抗原修复、灭活内源性过氧化物酶、血孵育一抗 4 度过夜、复温、孵育二抗、SABC、DAB 显色、复染、脱水、表皮、真皮厚度检测： 使用 ImageJ 软件系统检测 50 倍放大倍数皮肤切本，计算厚度的平均值。统计学分析： 数据分析采用 SPSS 18.0 软件，图像数据采用 ImageJ 软件。数值数据采用 x_±s 表示。

图 2 C57BL/6 乳鼠出生后皮肤组织 Masson染色结果，比例尺为：2000μm。表 1 胎鼠和幼鼠表皮厚度变化(单位 um)Tab．1 The variation of thickness of epidermis in infant mice(unit：um)表皮厚度（μm）天数（day） NS PRP3 day 422.77±12.47 435.07±10.53*5 day 440.79±11.33 459.98±9.05*7 day 471.25±9.86 497.25±8.12*10 day 498.24±12.85 516.74±14.36** 示与 Control 组比较有统计学差异，p<0.05，（n=20，M±SD）。

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本文编号：2732321