过表达MIIP基因对HCMV感染的U87细胞特性的影响

发布时间：2020-07-02 23:47

【摘要】：目的:1.利用人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染神经胶质瘤细胞U87,检测细胞迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)表达量的变化,从而探讨HCMV感染对U87细胞的影响。2.通过检测迁移侵袭抑制蛋白(MIIP)基因及其蛋白表达水平的增减,结合细胞增殖、侵袭及迁移水平的波动,探讨HCMV和神经胶质瘤的发生发展之间的相关性及科学意义。方法与材料:1.HCMV AD169(MOI为5)感染神经胶质瘤细胞U87,利用相差显微镜观察U87细胞在未感染和感染后6h、12h、24h、48h的形态学特征变化。2.用过表达的MIIP基因慢病毒感染HCMV阳性的U87细胞作为实验组,同时将仅感染HCMV的U87细胞作为对照组,由空载体CMV4转染的HCMV感染的U87细胞作为空质粒组。分别收集细胞用Western-blot检测MIIP编码蛋白的表达量的变化。3.用CCK-8法检测神经胶质瘤细胞U87的增殖活性的情况。4.用Transwell体外迁移实验检测实验组、空质粒组和对照组的细胞迁移能力。5.用Transwell体外侵袭实验和划痕实验检测实验组、空质粒组和对照组的细胞侵袭力。结果:1.HCMV感染U87细胞后,细胞形态有明显的变化。2.Western-blot检测表明实验组(U87+HCMV/MIIP组)细胞的MIIP蛋白表达量较空质粒组(U87+HCMV/CMV4组)和对照组(U87+HCMV组)相比明显上调(P0.01)。3.CCK-8检测表明对照组细胞的增殖能力明显强于实验组(P0.01)。4.Transwell体外迁移检测表明,与空质粒组、对照组相比,实验组细胞发生迁移的总数明显减少,实验组细胞的迁移能力明显弱于空质粒组和对照组(P0.01)。5.Transwell体外侵袭实验检测表明较空质粒组和对照组,实验组发生侵袭的细胞显著少于空质粒组和对照组,实验组细胞的侵袭力明显减弱,且细胞数显著下调(P0.01);划痕实验显示实验组迁移能力显著降低(P0.01)。结论:人巨细胞病毒(HCMV)人群中的感染率极高,病毒能够出现激活状态和潜伏状态交替出现的情况,潜伏感染的病毒因基因转录被抑制不能产生并释放新的病毒颗粒,而病毒激活状态下可产生释放新的病毒颗粒,HCMV的激活受到各种转录因子及细胞因子等多种因素的作用HCMV感染与多种肿瘤潜在关系,MIIP基因是新发现的抑癌基因,其表达缺失时易出现细胞有丝分裂失控,肿瘤细胞易形成并易发生迁移及侵袭。本实验过表达MIIP基因后观察HCMV感染的神经胶质瘤U87细胞迁徙能力、增殖能力、侵袭能力等特性的改变,得出初步结论如下:1、HCMV感染的U87细胞的增殖活性受到过表达MIIP基因的抑制;2、HCMV感染的U87细胞的迁移能力在MIIP基因过表达后减弱;3、MIIP基因过表达后HCMV感染的U87细胞的侵袭能力受到抑制。
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R373
【图文】：

血清培养基,青岛大学,硕士学位论文,多角

0%血清培养的胶质瘤细胞U87（×100倍）

培养的,细胞

在培养的过程中，这种细胞能够贴壁生长，形状具有扁平梭形的特性，其大小比较均匀，如图 3.2.1 所示。图3.2.1 经过10%FBS培养的实验细胞(HELF)（×100倍）

【参考文献】