DiO标记对人骨髓间充质干细胞生物学功能的影响

发布时间：2020-07-08 01:04

【摘要】：目的用细胞膜绿色荧光探针Di O标记人骨髓间充质干细胞(h BMMSCs),探讨其对h BMMSCs生物学功能的影响。方法采用Ficoll密度梯度离心法分离、培养h BMMSCs;流式细胞术检测Di O对h BMMSCs的标记效率;通过Transwell迁移实验、平板克隆实验、生长曲线分析、成脂及成骨诱导实验分别检测Di O对h BMMSCs迁移、增殖和多向分化能力的影响。结果Di O对h BMMSC的标记效率可达(99.5±0.4)%;Transwell迁移实验、平板克隆实验、生长曲线分析、成脂及成骨诱导实验结果表明,与未标记h BMMSCs相比,标记后的h BMMSCs迁移、增殖及成脂、成骨分化能力未见明显改变,差异均无统计学意义(P均0.05)。结论经Di O处理未见明显影响h BMMSCs的生物学功能,可做为安全、有效的h BMMSCs体外标记绿色荧光染料。
【图文】：

注:A，未标记hBMMSCs白光图;B，DiO标记的hBMMSCs白光图;C，DiO标记的hBMMSCs荧光图。图1DiO标记后hBMMSCs荧光图(×100)2．2hBMMSCs的标记效率荧光显微镜下可观察到经DiO标记24h后的hBMMSCs呈现绿色荧光，见图1。流式细胞术检测结果显示，标记DiO的hBMMSCs阳性率可达到(99．5±0．4)%，未标记的hBMMSCs阳性率仅为(0．5±0．4)%，差异有统计学意义(t=568．4，P＜0．05)。2．3DiO标记对hBMMSCs迁移能力的影响Transwell迁移实验结果显示，DiO标记的hBMMSCs迁移数目约为(88．0±3．1)个，与未标记hBMMSCs(87．3±1．5)个相比，差异无统计学意义(t=0．05，P＞0．05)。2．4DiO标记对hBMMSCs增殖能力的影响克隆形成试验结果显示，2周后DiO标记的hBMMSCs形成的克隆数目约为(203．7±17．9)个，与未标记hBMMSCs(196．7±12．0)个相比，差异无统计学意义(t=0．32，P＞0．05)。细胞增殖实验显示，DiO标记后hBMMSCs与未标记hBMMSCs的生长曲线变化基本一致，(F=0．005，P＞0．05)，见图2。图2DiO标记后hBMMSCs生长曲线2．5DiO标记对hBMMSCs分化能力的影响分别对DiO标记与未标记的hBMMSCs进行成脂和成骨诱导，成脂诱导6d后两组细胞在光学显微镜下均可观察到折光性很强的小空泡出现，提示脂滴形成，诱导2周后，细胞用油红O染色，两组细胞胞浆中均可见大量桔红色的小脂滴(图3A)。细胞经成骨诱导3周后，用茜素红染色，光镜下可看见大量阳性的胞质染成红棕色的多边形细胞(图3B)。表明DiO标记对hBMMSCs向成脂细胞和成骨细胞分化的能力无明显影响。注:A，油红O染色;B，茜素红S染色。图3DiO标记后hBMMSCs成脂诱导和成骨诱导(×100)·54·临床检验杂志2016年1月第34卷第1期ChinJClinLabSci，Jan．2016，Vol．34，No．1

注:A，未标记hBMMSCs白光图;B，DiO标记的hBMMSCs白光图;C，DiO标记的hBMMSCs荧光图。图1DiO标记后hBMMSCs荧光图(×100)2．2hBMMSCs的标记效率荧光显微镜下可观察到经DiO标记24h后的hBMMSCs呈现绿色荧光，见图1。流式细胞术检测结果显示，标记DiO的hBMMSCs阳性率可达到(99．5±0．4)%，未标记的hBMMSCs阳性率仅为(0．5±0．4)%，差异有统计学意义(t=568．4，P＜0．05)。2．3DiO标记对hBMMSCs迁移能力的影响Transwell迁移实验结果显示，DiO标记的hBMMSCs迁移数目约为(88．0±3．1)个，与未标记hBMMSCs(87．3±1．5)个相比，差异无统计学意义(t=0．05，P＞0．05)。2．4DiO标记对hBMMSCs增殖能力的影响克隆形成试验结果显示，2周后DiO标记的hBMMSCs形成的克隆数目约为(203．7±17．9)个，与未标记hBMMSCs(196．7±12．0)个相比，差异无统计学意义(t=0．32，P＞0．05)。细胞增殖实验显示，DiO标记后hBMMSCs与未标记hBMMSCs的生长曲线变化基本一致，(F=0．005，P＞0．05)，见图2。图2DiO标记后hBMMSCs生长曲线2．5DiO标记对hBMMSCs分化能力的影响分别对DiO标记与未标记的hBMMSCs进行成脂和成骨诱导，成脂诱导6d后两组细胞在光学显微镜下均可观察到折光性很强的小空泡出现，提示脂滴形成，诱导2周后，细胞用油红O染色，两组细胞胞浆中均可见大量桔红色的小脂滴(图3A)。细胞经成骨诱导3周后，用茜素红染色，光镜下可看见大量阳性的胞质染成红棕色的多边形细胞(图3B)。表明DiO标记对hBMMSCs向成脂细胞和成骨细胞分化的能力无明显影响。注:A，油红O染色;B，茜素红S染色。图3DiO标记后hBMMSCs成脂诱导和成骨诱导(×100)·54·临床检验杂志2016年1月第34卷第1期ChinJClinLabSci，Jan．2016，Vol．34，No．1

注:A，未标记hBMMSCs白光图;B，DiO标记的hBMMSCs白光图;C，DiO标记的hBMMSCs荧光图。图1DiO标记后hBMMSCs荧光图(×100)2．2hBMMSCs的标记效率荧光显微镜下可观察到经DiO标记24h后的hBMMSCs呈现绿色荧光，见图1。流式细胞术检测结果显示，标记DiO的hBMMSCs阳性率可达到(99．5±0．4)%，未标记的hBMMSCs阳性率仅为(0．5±0．4)%，差异有统计学意义(t=568．4，P＜0．05)。2．3DiO标记对hBMMSCs迁移能力的影响Transwell迁移实验结果显示，DiO标记的hBMMSCs迁移数目约为(88．0±3．1)个，与未标记hBMMSCs(87．3±1．5)个相比，差异无统计学意义(t=0．05，P＞0．05)。2．4DiO标记对hBMMSCs增殖能力的影响克隆形成试验结果显示，2周后DiO标记的hBMMSCs形成的克隆数目约为(203．7±17．9)个，与未标记hBMMSCs(196．7±12．0)个相比，差异无统计学意义(t=0．32，P＞0．05)。细胞增殖实验显示，DiO标记后hBMMSCs与未标记hBMMSCs的生长曲线变化基本一致，(F=0．005，P＞0．05)，见图2。图2DiO标记后hBMMSCs生长曲线2．5DiO标记对hBMMSCs分化能力的影响分别对DiO标记与未标记的hBMMSCs进行成脂和成骨诱导，成脂诱导6d后两组细胞在光学显微镜下均可观察到折光性很强的小空泡出现，提示脂滴形成，诱导2周后，细胞用油红O染色，两组细胞胞浆中均可见大量桔红色的小脂滴(图3A)。细胞经成骨诱导3周后，用茜素红染色，光镜下可看见大量阳性的胞质染成红棕色的多边形细胞(图3B)。表明DiO标记对hBMMSCs向成脂细胞和成骨细胞分化的能力无明显影响。注:A，油红O染色;B，茜素红S染色。图3DiO标记后hBMMSCs成脂诱导和成骨诱导(×100)·54·临床检验杂志2016年1月第34卷第1期ChinJClinLabSci，Jan．2016，Vol．34，No．1

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