microRNA-24通过自噬途径影响人脐静脉内皮细胞管腔形成的机制研究

发布时间：2020-07-14 07:14

【摘要】：目的1研究microRNA-24(miR-24)对自噬的调控作用及相关分子机制。2基于自噬探讨miR-24对雷帕霉素诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移及管腔形成的影响。方法1实验的分组、miR-24高表达质粒的转染及自噬模型的建立根据实验要求,将HUVECs随机分为对照组、miR-24高表达+雷帕霉素组、雷帕霉素组。对照组的HUVECs不给予任何处理。miR-24高表达+雷帕霉素组的HUVECs则先转染miR-24高表达质粒,然后用1000 nmol/L雷帕霉素干预6 h建立自噬模型。雷帕霉素组的HUVECs用1000 nmol/L雷帕霉素干预6h建立自噬模型。2检测各实验组自噬相关基因Beclin-1、LC3II表达水平及自噬小体生成情况RT-PCR实验检测Beclin-1和LC3Ⅱ的mRNA水平;免疫印迹实验(Western blotting)和免疫细胞化学实验(Immunocytochemistry)检测Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白水平。采用透射电镜观察细胞内部自噬小体的生成情况。3检测各实验组HUVECs形态、增殖、迁移及管腔形成的情况通过HE染色法观察各组HUVECs形态变化,CCK-8法检测各组HUVECs的增殖能力;划痕试验检测各组HUVECs迁移能力;进而用人工基底膜(Matrigel)试验检测各组HUVECs的成管能力。结果1与对照组比较,雷帕霉素组Beclin-1与LC3Ⅱ的mRNA和蛋白表达量均明显增加(P0.05),且细胞质中可见较多的自噬小体。而miR-24高表达+雷帕霉素组Beclin-1与LC3Ⅱ的mRNA和蛋白的表达量都只有较低程度的增加(P0.05),且细胞质中也仅有较少量的自噬小体生成。可见,miR-24能显著抑制Beclin-1与LC3Ⅱ的mRNA和蛋白的表达,并抑制自噬小体的形成。2与对照组比较,雷帕霉素组细胞形态发生了轻微的改变,呈不规则状态,并伴有少数细胞老化现象。细胞的活性、迁移数目及管腔样结构数量均稍有降低(P0.05)。而miR-24高表达+雷帕霉素组的细胞老化严重,其活性、迁移数目及管腔样结构数量均明显降低(P0.05)。结论1 miR-24可在转录水平直接抑制自噬相关基因Beclin-1与LC3Ⅱ的表达,并抑制自噬小体的形成,进而下调自噬水平。2 miR-24能显著抑制雷帕霉素诱导下的HUVECs增殖、迁移及管腔形成能力,其机制可能与细胞自噬存在交叉,下调细胞自噬水平可能是miR-24抑制细胞管腔形成的机制之一。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R329.2

【参考文献】

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1 周彬;黄巧冰;;血管内皮细胞自噬在疾病发生发展中的作用[J];广东医学;2013年19期

本文编号：2754673