Gαq对调节性B细胞分化与功能的调控及机制研究
发布时间：2020-07-18 12:47
【摘要】：研究背景:调节性B细胞(Bregs)是一种B细胞亚群,近年来其免疫抑制功能越来越吸引众学者的研究兴趣。在包括炎症、肿瘤、自身免疫性疾病等很多疾病的小鼠模型研究中,调节性B细胞通过不同机制发挥其免疫抑制作用。此外,在人类自身免疫性疾病观察研究中发现调节性B细胞的改变与一些自身免疫病的疾病进展有关。研究证明调节性B细胞主要通过产生白细胞介素-10(IL-10)发挥抑制免疫应答的作用。Gαq是GNAQ基因编码的异源三聚体G蛋白(G protein)的α亚单位,它广泛表达于哺乳动物细胞中。近40%的G蛋白偶联受体(GPCRs)依赖于Gq家族成员来转导胞外信号。研究证明Gαq在免疫系统中发挥重要作用,对很多免疫细胞具有调控作用。然而Gαq是否对调节性B细胞的免疫调节有调控作用还没有研究明确。研究目的:利用Gnnq基因敲除小鼠研究Gαq对调节性B细胞分化和功能的调控及其可能的分子机制。研究方法:1)通过流式细胞术检测Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾脏中脂多糖(LPS)刺激前后CD19+IL-10+调节性B细胞的比例。通过酶联免疫吸附测定检测两组培养上清中 IL-10的含量。2)分选出Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾脏中的调节性B细胞,分别与野生型小鼠脾脏Naive CD4+ T细胞共培养,通过流式细胞术检测两组CD4+ T细胞增殖,及其分化为调节性T细胞的比例。3)用参与调控IL-10表达的主要信号通路上的信号分子的特异性抑制剂预先处理Gnaq基因敲除小鼠和野生型小鼠脾脏中的B细胞,随后LPS诱导后流式细胞术检测两组CD19+IL-10+调节性B细胞的比例。蛋白质免疫印记法验证两组B细胞在LPS刺激后相关信号分子的磷酸化水平。4)收集类风湿关节炎(RA)患者外周血,分析这些患者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD19+CD24hiCD38hi调节性B细胞的比例和Gαq mRNA水平的相关性。研究结果:1)在Gnaq基因敲除小鼠中,经LPS诱导后CD19+IL-10+调节性B细胞的分化被抑制。2)Gnaq基因敲除小鼠脾脏调节性B细胞抑制CD4+ T细胞增殖和促进CD4+T细胞分化为调节性T细胞的能力受损。3)PI3K、Erk1/2 MAPK和p38 MAPK信号通路分子可能参与了Gαq对调节性B细胞分化的调控。4)类风湿关节炎患者外周血单个核细胞中CD19+CD24hiCD38hi调节性B细胞比例及Gαq mRNA水平降低,并且两者有显著的相关性。研究结论:本实验发现Gαq对调节性B细胞的分化及免疫抑制功能有调控作用,PI3K、Erk1/2 MAPK和p38 MAPK信号通路可能参与了 Gαq对调节性B细胞分化的调控。
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392.12
【图文】：
逦第一章材料与方法逦逡逑４）待胶彻底凝固后，小心拔出梳子，去掉两侧挡板，将凝胶放入电泳槽中，加逡逑入预冷电泳液使液面没过凝胶。逡逑５）逦ＲＮＡ样品与样本缓冲液按比例混合，上样入孔中。逡逑６）调节电压至１２０Ｖ，开始电泳３０ｍｉｎ。逡逑７）电泳完毕后将凝胶取出，放入ＣｈｅｍｉＤｏｃ？邋ＸＲＳ＋ｓｙｓｔｅｍ凝胶成像系统中观逡逑察（图１）。仅７５０ｂｐ处一条条带者基因型为ＷＴ，仅４００ｂｐ处一条条带者基因逡逑型为Ｇｎａｇ＇邋４００ｂｐ和７５０ｂｐ处共两条条带者基因型为以叫＋／—。逡逑ｒ＇－
逦第二章实验结果逦逡逑第二章实验结果逡逑２．１邋Ｇａｑ调控Ｂｒｅｇ细胞的分化逡逑２．邋１．邋１邋Ｇ／ｍｆ小鼠与ＷＴ小鼠脾脏中的Ｂｒｅｇ细胞比例无差异逡逑取６－８周龄同性小鼠与ＷＴ小鼠，分离脾脏细胞，流式细胞术分别逡逑检测ＣＤ１９＋ＣＤｌｄｈｉＣＤ５＋、ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋两种表型的Ｂｒｅｇ细胞比例，结果表明这逡逑两种表型的Ｂｒｅｇ细胞比例在小鼠与ＷＴ小鼠中无统计学差异（Ｐ邋＞邋０．０５）逡逑（图邋２）。逡逑Ｇａｔｅｄ：ＣＤ１９＋逡逑
逡逑ＷＴ小鼠（Ｐ邋＜邋０．０５）（图３邋Ｃ）。说明Ｇｔｘｑ参与调控ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋Ｂｒｅｇ细胞的逡逑分化。逡逑Ａ逦ｌｓｏｔｙｐｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ逦ＣＳ７ＢＬ／６逦Ｇｎａｑ＾逦Ｂ邋＾逦Ｃ逡逑“■彳媭％逦１１．９８％逦７．５９％逦｜邋ｌ逦？逦Ｉ逦：逦１逡逑Ｉ…——Ｊ逦｛逦ｆ逦逦邋ｆ邋ｉ？邋－ｒ－逦ｓ逡逑ｌａ邋ｒ邋＿邋ｎ逡逑＾邋＂ｒｍ邋ＦＩ邋－１Ｂ逡逑ｊ逦逦逦邋逦逦逦逦逦．逦．逦逦邋逦逦ｓ－逦逦逦逦逡逑０）１９邋逦逦逦—￣—＾逦＊邋ａｗｍ邋0ｍｆ逦ｃｓｗ逡逑图３邋（？？＜／＿小鼠脾脏Ｂ细胞经ＬＰＳ诱导的ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋Ｂｒｅｇ细胞比例较ＷＴ小逡逑鼠低逡逑２．２邋Ｇａｑ调控Ｂｒｅｇ细胞的免疫抑制功能逡逑２．邋２．邋１邋Ｇ／ｉ叫＋小鼠脾脏Ｂｒｅｇ细胞抑制ＣＤ４＋邋Ｔ细胞增殖的能力受损逡逑分选纯化小鼠和ＷＴ小鼠脾脏ＣＤ邋１９＋ＣＤ１邋ｄｈｌＣＤ５＋邋Ｂｒｅｇ细胞、ＷＴ小逡逑鼠Ｔｒｅｇ细胞（用作阳性对照），分别与ＣＦＳＥ标记的ＷＴ小鼠脾Ｎａ＿ｆｖｅＣＤ４＋Ｔ逡逑细胞共培养，７２ｈ后流式细胞术检测各组ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖状况。结果显示逡逑Ｂｒｅｇ组ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖比例小于阴性对照组（Ｐ邋＜邋０．００１）。但ＧｍＶ—逡逑Ｂｒｅｇ组ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖比例大于ＷＴ邋Ｂｒｅｇ组（Ｐ邋＜邋０．０５）（图４）。表明逡逑Ｇ７＜Ｍ、鼠脾脏Ｂｒｅｇ细胞对ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖有抑制作用
本文编号：2760908
【学位授予单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392.12
【图文】：
逦第一章材料与方法逦逡逑４）待胶彻底凝固后，小心拔出梳子，去掉两侧挡板，将凝胶放入电泳槽中，加逡逑入预冷电泳液使液面没过凝胶。逡逑５）逦ＲＮＡ样品与样本缓冲液按比例混合，上样入孔中。逡逑６）调节电压至１２０Ｖ，开始电泳３０ｍｉｎ。逡逑７）电泳完毕后将凝胶取出，放入ＣｈｅｍｉＤｏｃ？邋ＸＲＳ＋ｓｙｓｔｅｍ凝胶成像系统中观逡逑察（图１）。仅７５０ｂｐ处一条条带者基因型为ＷＴ，仅４００ｂｐ处一条条带者基因逡逑型为Ｇｎａｇ＇邋４００ｂｐ和７５０ｂｐ处共两条条带者基因型为以叫＋／—。逡逑ｒ＇－
逦第二章实验结果逦逡逑第二章实验结果逡逑２．１邋Ｇａｑ调控Ｂｒｅｇ细胞的分化逡逑２．邋１．邋１邋Ｇ／ｍｆ小鼠与ＷＴ小鼠脾脏中的Ｂｒｅｇ细胞比例无差异逡逑取６－８周龄同性小鼠与ＷＴ小鼠，分离脾脏细胞，流式细胞术分别逡逑检测ＣＤ１９＋ＣＤｌｄｈｉＣＤ５＋、ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋两种表型的Ｂｒｅｇ细胞比例，结果表明这逡逑两种表型的Ｂｒｅｇ细胞比例在小鼠与ＷＴ小鼠中无统计学差异（Ｐ邋＞邋０．０５）逡逑（图邋２）。逡逑Ｇａｔｅｄ：ＣＤ１９＋逡逑
逡逑ＷＴ小鼠（Ｐ邋＜邋０．０５）（图３邋Ｃ）。说明Ｇｔｘｑ参与调控ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋Ｂｒｅｇ细胞的逡逑分化。逡逑Ａ逦ｌｓｏｔｙｐｅ邋ｃｏｎｔｒｏｌ逦ＣＳ７ＢＬ／６逦Ｇｎａｑ＾逦Ｂ邋＾逦Ｃ逡逑“■彳媭％逦１１．９８％逦７．５９％逦｜邋ｌ逦？逦Ｉ逦：逦１逡逑Ｉ…——Ｊ逦｛逦ｆ逦逦邋ｆ邋ｉ？邋－ｒ－逦ｓ逡逑ｌａ邋ｒ邋＿邋ｎ逡逑＾邋＂ｒｍ邋ＦＩ邋－１Ｂ逡逑ｊ逦逦逦邋逦逦逦逦逦．逦．逦逦邋逦逦ｓ－逦逦逦逦逡逑０）１９邋逦逦逦—￣—＾逦＊邋ａｗｍ邋0ｍｆ逦ｃｓｗ逡逑图３邋（？？＜／＿小鼠脾脏Ｂ细胞经ＬＰＳ诱导的ＣＤ１９＋ＩＬ－１０＋Ｂｒｅｇ细胞比例较ＷＴ小逡逑鼠低逡逑２．２邋Ｇａｑ调控Ｂｒｅｇ细胞的免疫抑制功能逡逑２．邋２．邋１邋Ｇ／ｉ叫＋小鼠脾脏Ｂｒｅｇ细胞抑制ＣＤ４＋邋Ｔ细胞增殖的能力受损逡逑分选纯化小鼠和ＷＴ小鼠脾脏ＣＤ邋１９＋ＣＤ１邋ｄｈｌＣＤ５＋邋Ｂｒｅｇ细胞、ＷＴ小逡逑鼠Ｔｒｅｇ细胞（用作阳性对照），分别与ＣＦＳＥ标记的ＷＴ小鼠脾Ｎａ＿ｆｖｅＣＤ４＋Ｔ逡逑细胞共培养，７２ｈ后流式细胞术检测各组ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖状况。结果显示逡逑Ｂｒｅｇ组ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖比例小于阴性对照组（Ｐ邋＜邋０．００１）。但ＧｍＶ—逡逑Ｂｒｅｇ组ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖比例大于ＷＴ邋Ｂｒｅｇ组（Ｐ邋＜邋０．０５）（图４）。表明逡逑Ｇ７＜Ｍ、鼠脾脏Ｂｒｅｇ细胞对ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖有抑制作用
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 Gopesh Srivastava;;The Pre-B Cell Receptor and Its Function during B Cell Development[J];Cellular & Molecular Immunology;2004年02期
本文编号：2760908
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/2760908.html
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