慢性高原病大鼠模型铁调素、生长分化因子15表达的研究

发布时间：2020-08-03 13:30

【摘要】：目的:慢性高原病(CMS)以红细胞过度增生和低氧血症为特征,其主要病因为机体缺氧。本研究以常氧组为对照,检测CMS模型大鼠HAMP m RNA、GDF15 m RNA及其蛋白表达水平和其他相应的铁代谢指标(包括血清铁、血清铁蛋白),旨在探讨两者的改变及其相互关系,明确CMS大鼠铁代谢的变化。方法:将59只健康雄性Wistar大鼠,从兰州到西宁,适应性喂养2周后进行实验。随机分为2组,即常氧对照组22只(西宁,海拔2260m,温度18-20℃),低氧实验组37只(低压氧舱模拟海拔5000m,氧浓度10.8%,压力54.02Kpa,温度18-20℃,22h/d),30天后进行检测:(1)血气分析、血常规检测;(2)比色法测定血清铁及免疫发光法测血清铁蛋白;(3)ELISA法检测血清及肝脏匀浆hepcidin含量;(4)采用荧光实时定量RT-PCR法检测肝脏HAMP m RNA、GDF15 m RNA水平;(5)采用免疫组化法检测大鼠胸骨GDF15蛋白水平;(6)随机选取常氧组大鼠6只,低氧组大鼠5只,用于肺动脉压检测;(7)实验数据采用SPSS17.0统计软件处理,首先行正态性检验,资料均为正态分布或近似正态分布,数据用均数±标准差(`x±s)表示,两组间比较用独立样本的t检验,等级资料用秩和检验,CMS组各指标间的相互关系用直线相关分析,以α=0.05为检验水准。结果:(1)同常氧组大鼠HCT(53.02±2.92)%、HGB(185.69±12.14)g/L、平均肺动脉压(29.78±4.47)mm Hg、血清铁(0.87±0.11)μmol/L、血清铁蛋白(2.05±0.21)μg/L、胸骨GDF15蛋白表达积分(3.43±1.09)比较,低氧组HCT(71.33±5.34)%、HGB(248.88±17.36)g/L、平均肺动脉压(66.06±17.36)mm Hg、血清铁(2.17±0.35)μmol/L、血清铁蛋白(11.52±1.58)μg/L、胸骨GDF15蛋白表达积分(5.08±0.70)等指标升高(均P0.05);同常氧组大鼠的PLT(758.75±92.77)×109/L、血清hepcidin水平(14.16±4.49)ng/ml、肝脏hepcidin水平(154.79±95.08)ng/ml相比较,低氧组PLT(472.09±117.90)×109/L、血清hepcidin水平(10.13±5.53)ng/ml、肝脏hepcidin水平(64.04±40.30)ng/ml降低(均P0.05);常氧组和低氧组的SO2相比无明显统计学差异(P0.05)。(2)低氧组肝脏HAMP m RNA表达(0.67±0.33)低于常氧对照组(1.03±0.27)(P0.05),低氧组肝脏GDF15 m RNA表达(4.46±2.58)高于常氧对照组(1.10±0.54)(P0.05);低氧组HAMP m RNA、GDF15 m RNA与HGB、HCT均无相关性(P0.05)。(3)CMS组HGB分别与SI(r=0.925,P=0.000)、SF(r=0.612,P=0.000)呈正相关,与血清hepcidin水平(r=-0.405,P=0.021)呈负相关;CMS组HCT分别与SI(r=0.889,P=0.000)、SF(r=0.562,P=0.001)呈正相关,与血清hepcidin(r=-0.367,P=0.039)水平呈负相关;CMS组SI与SF呈正相关(r=0.573,P=0.001),与血浆hepcidin水平呈负相关(r=-0.43,P=0.014)。结论:低氧条件下铁代谢的调节基因hepcidin表达下调,铁调素在CMS中维持较低水平,促进了机体铁吸收同时增加了储存铁的动员,进一步促进红细胞增殖。GDF15在CMS中表达增加,可能与CMS红系成熟有关,是联系红系生成和铁调控的信号分子,从而进一步丰富了CMS的理论研究。
【学位授予单位】：青海大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R594.3;R-332
【图文】：

图 2.1 双抗体夹心 ELISA 法实验原理示意图（3）测试所需仪器设备450nm 酶标仪、EP 管、吸水纸、Hepcidin 检测试剂盒（4）试剂准备：① 分别将试剂盒中所有的试剂、标本缓慢均衡至室温（18-25℃）。② 标准品的配制：标准品中加入标准品稀释液1ml，盖好后室温静置大约10min，同时反复搓动以助溶解，Hepcidin标准品原始浓度为80 ng/ml。准备稀释标准品的EP管，每个EP管加入500μl的标准品稀释液，再分别依次倍比稀释为如下浓度：40 ng/ml ，20 ng/ml，10 ng/ml，5 ng/ml，2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625ng/ml，标准品稀释液（0ng/ml）直接作为空白孔。(表2.4)。表 2.4 Hepcidin 标准品的稀释方法80 ng/ml 1 号标准品 原倍标准品40 ng/ml 2 号标准品 500μl 的 1 号标准品加入 500μl 标准品稀释液20 ng/ml 3 号标准品 500μl 的 2 号标准品加入 500μl 标准品稀释液

测定血清hepcidin的标准曲线

）绘制标准曲线后计算血清 hepcidin、肝脏 hepcidin 浓度值：X 轴为 O.D. 轴为标准品浓度，标准曲线如图 2.2-2.3。图 2.2 测定血清 hepcidin 的标准曲线Figure2.2 The standard curve of hepcidin in serumy=1.2114x2+13.411x+0.4762R2=0.9973

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本文编号：2779700