肠道病毒71型通过抑制TRIM25的表达影响RIG-I信号传导

发布时间：2020-08-03 12:06

【摘要】：肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的主要病原体之一,可引起多种神经并发症。该疾病多发于5岁以下儿童,具有较高的死亡率,曾在全世界范围内多次大规模流行,严重威胁着人类的生命健康,因此EV71病毒的相关预防和治疗显得尤为重要。维甲酸诱导基因I(retinoic acid inducible-gene I,RIG-I)作为宿主细胞内识别双链RNA的一种受体,能够帮助机体识别外来病毒RNA,启动机体免疫信号,增强机体抗病毒能力。TRIM25(Tripartite motif-containing protein 25)作为泛素化RIG-I的重要E3泛素连接酶,能够在RIG-I识别病毒RNA之后通过泛素化RIG-I的N端CARD区而将其激活,从而启动下游信号通路,促进I型干扰素(interferon typeⅠ,IFN)的表达及相关炎症因子的分泌,帮助宿主抵御外来侵害。有研究表明,EV71感染后可被RIG-I信号通路识别,并通过抑制RIG-I信号通路使得自身在宿主细胞内得以复制和扩散。但目前关于EV71如何作用于RIG-I信号通路的详细调节机制的研究较少,因此需要进一步的探究。在本研究中,我们发现EV71的3C蛋白可抑制RIG-I介导的IFN-β水平的提高,并且可以抑制RIG-I和TRIM25蛋白的表达。在mRNA水平上,EV71的3C蛋白可以抑制干扰素刺激基因(ISG15,ISG56)以及IFN-β水平的提高。此外,我们发现TRIM25的表达能够促进RIG-I的稳定,降低EV71的3C蛋白对它的降解,从而促进IFN-β水平的恢复,但TRIM25对于RIG-I泛素化起重要作用的活性位点的单个突变体TRIM25-L69A和TRIM25-V72A以及TRIM25四个主要结构域单独截短的突变体TRIM25-RING,TRIM25-Bbox,TRIM25-CCD,TRIM25-SPRY未起到同样的恢复效果。对EV71-3C的蛋白酶活性位点进行单点突变之后,发现3C蛋白对RIG-I和TRIM25蛋白的降解作用减弱。除此之外,我们还探究了能引起HFMD的其他主要病原体,如肠道病毒(EV-D68)和柯萨奇病毒(CVB3,CVA6,CVA16),发现除CVA16外,CVB3,EV-D68和CVA6肠道病毒的3C蛋白对RIG-I和TRIM25的蛋白表达同样存在抑制作用。综上,我们发现了肠道病毒属的主要成员在感染宿主细胞时3C蛋白新的作用机制,这将为我们进一步研究该病毒的分子致病机制和疾病的治疗奠定基础。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R373.2
【图文】：

外壳蛋白,病毒粒子

图 1.1 EV71病毒粒子及外壳蛋白结构[26]Figureure 1.1 Structural organization of the EV71[26]

功能图,结构蛋白,肠道病毒,非结构蛋白

图 1.2 肠道病毒编码蛋白结构示意图：结构蛋白和非结构蛋白及其功能[25]Figure1.2 Scheme of the enterovirus genome:the polyprotein products and theirmajor functions[25]1.1.2 RLRs 信号通路

启动子,蛋白,荧光素酶,质粒

19图 3.1 EV71和 CVB3 的 3C蛋白减少 RIG-I 表达并抑制 IFN-β 启动子活化Figure3.1 The 3C proteins of EV71 and CVB3 reduce RIG-I expression andinhibit IFN-β promoter activation（A，D，G和 J）将由 IFN-β-Luc 荧光素酶报告质粒，Renilla荧光素酶对照报告质粒和相应的质粒共转染进入 HEK293T细胞。48h后收取细胞，裂解后进行免疫印迹。抗体分别为 anti-Flag，anti-HA，anti-Tubulin。（B，E，H和 K）用Dual-Luciferase Reporter Assay System 分析细胞裂解物中 IFN-β 的表达水平。（C，F，I 和 L）取一部分 A，D，G和 J 设计的实验的 HEK293T细胞，提取

【参考文献】