脑室内注射地塞米松对雌性小鼠能量代谢和生殖功能的影响

发布时间：2020-08-07 14:13

【摘要】：目的:下丘脑-垂体-肾上腺轴参与能量平衡的调节,且对生殖和发育有着复杂的影响,GC(glucocorticoid,糖皮质激素)在外周的作用报道较多,但对其在中枢的直接作用报道较少。因此,本研究通过侧脑室注射地塞米松,探讨其对能量代谢和生殖系统的影响。方法:将24只小鼠随机分成2组,每组12只,通过脑立体定位仪,在小鼠皮下埋置ALZET 1004,通过与kit3连接,分别将乙醇(对照组、CON组)和地塞米松(DEX组)缓慢、持续的送入小鼠侧脑室,连续给药28天。1、置管前的当天和置管后每天早上同一时间测量小鼠的体重和摄食量;置管后第27天进行小鼠腹腔葡萄糖耐量试验;置管后第29天处死小鼠,迅速分离小鼠棕色脂肪组织、性腺周围WAT(white adipose tissue,白色脂肪组织)、肾脏周围WAT,皮下WAT,并称重;迅速分离下丘脑,实时荧光定量PCR(realtime PCR)检测Ag RP、NPY、POMC m RNA的表达情况;分离完整的大脑组织,免疫组化检测Ag RP、NPY、POMC蛋白的表达水平。2、置管后第15天起,每天进行雌鼠阴道上皮脱落细胞涂片、染色,以观察动情周期;置管后第22天起,在小鼠处于动情间期时,眼眶内眦静脉取血,分离出血清,酶联免疫吸附测定雌二醇水平;置管后第29天处死小鼠,分离卵巢、子宫,HE染色进行观察;分离小鼠的下丘脑,realtime PCR检测Kiss-1m RNA的表达水平。结果:1、小鼠侧脑室慢性持续性药物干预第6天起,DEX组的摄食量明显多于CON组(P0.05),第12天起,DEX组的体重明显大于CON组(P0.05)。葡萄糖耐量实验结果显示两组小鼠在各监测时间点的血糖值均无统计学差异。第29天处死小鼠,发现DEX组性腺周围WAT的重量大于CON组(P0.05)。而两组间其余部分脂肪无统计学差异。DEX组下丘脑Ag RP、NPY m RNA表达量明显升高(P0.01),两组间POMC m RNA表达量无明显差异。免疫组化的结果也显示出同样的趋势。2、小鼠侧脑室慢性持续性干预28天,均未对其动情周期产生影响,两组均表现为规律、完整的4-5天动情周期。两组间卵巢和子宫病理形态无明显差异。两组间血清雌二醇水平和下丘脑Kiss1 m RNA表达无明显差异。结论:1、GC慢性持续地直接作用于中枢会对能量代谢产生影响。GC通过上调食欲刺激因子Ag RP、NPY的表达,导致小鼠摄食量、体重增加,性腺周围WAT重量增加。但中枢GC长期持续的作用不会引起机体葡萄糖耐量的改变。2、GC慢性持续地作用于中枢可能不会影响生殖功能。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R33
【图文】：

示意图,渗透泵,胶囊,示意图

Cannula、Catheter Tube连接。（3）用ALZET配备的 1ml注射器小心将配好的工作液抽出，然接好的管路注满，再将注射器的针头插入到ALZET胶囊渗透泵的底缓慢推注液体，直到泵的外口有液体渗出，说明泵已经注满，注以免产生气泡影响泵的注液量。（4）将灌注好的ALZET胶囊渗透泵与Pump flow moderator连Brian infusion cannula有液体渗出，说明管路及渗透泵均充盈（5）本实验采用ALZET 1004，持续注射 28 天，将DEX储存液配置成DEX工作液，即实验组注射DEX的量为 14ug/100ul，每天注射对照组注射溶剂乙醇的浓度与实验组乙醇的稀释倍数相同，均稀对照组溶剂乙醇的浓度为 14%。（6）将充盈好的泵放入无菌 0.9%生理盐水中， 37℃水浴 4囊渗透泵已经完全准备好，可以开始工作。

渗透泵,胶囊,实物,小鼠

图 1.2 ALZET 胶囊渗透泵实物图2.3 小鼠侧脑室植入渗透泵（1）麻醉：小鼠称重后腹腔注射 10%的水合氯醛完全失去意识后再进行下一步操作。（2）将麻醉好的小鼠剃去头顶部毛发，以俯卧位上方，并使水平上的左右 2 根钢针的尖端刚好对准小并将小鼠的舌头拉出，避免小鼠在注射过程中窒息死钢针，直至松紧适宜，整个头颅水平固定，不能摇动看），使小鼠头部固定良好，大脑平面平整，左右对称（3）用碘伏消毒头皮，在头顶正中切开皮肤，并灼烧皮下组织和骨膜，暴露颅骨，可见清晰骨缝，找（4）移动定位仪针尖至Bregma点（如图：1.3），后 0.5mm，旁开 1.0mm，即 X轴调整为 1.0mm，Y轴调整

示意图,小鼠,示意图,手术后

bregma示意图

【相似文献】