利用体外培养人记忆B细胞研发抗H1N1流感病毒中和抗体

发布时间：2020-08-12 18:54

【摘要】：研究背景随着全球健康和世界经济的高速发展进程,传染疾病在世界范围内的传播变得更加快捷,特别是流感病毒,每年的流感疫情都会导致大约3百万-5百万的病人入院治疗。抗病毒药物是现阶段主要的治疗手段,但是由于其存在药物耐受,治疗窗口期短等问题,急需有其他手段来更有效的治疗流感病毒感染。抗体治疗是近些年来研究的热点,通过有效的抗体筛选手段,筛选得到能够有效中和流感病毒的抗体成为众多科学家研究的目标。研究目的应用记忆B细胞培养实验平台,从免疫流感疫苗的志愿者血液中筛选得到具有中和H1N1流感病毒的抗体,并通过体外结合活性,中和活性等功能性实验,初步评估筛选得到的抗体,并为研发抗流感病毒提供有效治疗药物。研究方法基于记忆B细胞培养平台,从免疫流感疫苗的志愿者血液中分离PBMC,磁珠分选CD19~+CD27~+记忆B细胞,在含IL-2,IL-21及293T-mCD40L滋养层细胞的培养基中培养13天,进行ELISA检测筛选阳性有效孔;对阳性有效孔进行裂解,反转录,单细胞PCR获得抗体基因,并构建到IgG抗体表达载体上进行表达,纯化;进而,利用ELISA结合活性实验,Western-Blot实验,HAI实验等进行体外实验鉴定;研究结果我们成功的建立起记忆B细胞培养平台,并筛选得到16株具有H1N1蛋白结合活性的抗体,其中,7株具有H1N1荧光病毒中和活性(单克隆抗体Hb-B3,B5,C6,E7,A8,A9,C9具有强的中和活性),并且,Hb-B5和Hb-A9能够广谱结合流感病毒的HA蛋白(H1,H3,H5,H7,H10),其中Hb-A9具有流感病毒组1(H1N1,H5N1,H5N6)和组2的交叉中和活性(H7N9)。结论单克隆抗体Hb-B3,B5,C6,E7,A8,A9,C9在实验中展现出强的中和活性,其中Hb-B5在体外结合实验中显示出广谱结合活性,可以为之后研究流感病毒诊断试剂开发提供依据,抗体Hb-A9具有很好的流感病毒组1和组2中和活性,可以作为潜力抗体进行下一步的研究,并应用到临床治疗上。
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R392
【图文】：

流感病毒感染,流感病毒,症状,流感

通常被简称为流感，为一种由流在世界各地传播。每年的流感季都造成约 3感在北半球及南半球爆发的季节主要为冬季致死的案例多半发生在免疫力低下的小孩感染流感病毒的症状可轻可重[3]，最常见的症咙痛、咳嗽和疲倦感等（图 1）。被感染者持续一周后解除，但咳嗽的症状可能会持续呕吐症状[4]，例如孩童感染 H5N1 亚型流感人感染者中并不常见；恶心和呕吐一般发生感可能的诱发的并发症包括病毒性肺炎、次疾病恶化（如气喘或心脏衰竭）等，给我

流感病毒,血清型,分型

图 2：流感病毒电镜扫描图类的血清型包含 H1N1、H2N2、H3N2、10N7、H7N9[11]。其中，根据它们的组 1 包括 H1，H2，H5，H6，H8，，H4，H7 ，H10，H14 和 H15[12]。近, 也包含在 HA 的分型里面[13, 14]，这组 1 的流感病毒中（图 3）。

流感病毒,分型,血清型,系统发育

图 2：流感病毒电镜扫描图能感染人类的血清型包含 H1N1、H2N2、H3N2、H5N1、H7H7N3、H10N7、H7N9[11]。其中，根据它们的系统发育关 1 和组 2：组 1 包括 H1，H2，H5，H6，H8，H9，H11，2 包括 H3，H4，H7 ，H10，H14 和 H15[12]。近期还在蝙H17, H18, 也包含在 HA 的分型里面[13, 14]，这两个新的亚也被分到组 1 的流感病毒中（图 3）。

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