鞘胺醇-1-磷酸（S1P）及其受体对人脐带间充质干细胞生存的影晌

发布时间：2017-03-31 08:12

  本文关键词：鞘胺醇-1-磷酸（S1P）及其受体对人脐带间充质干细胞生存的影晌，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：干细胞(stem cell)是一类未分化的具有自我复制功能和多向分化潜能的原始细胞,在一定条件下可分化为多种功能细胞和组织器官。间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSCs)作为成体干细胞的典型代表和重要成员,首先从骨髓中分离得到骨髓间充质干细胞。骨髓来源的细胞随着供体年龄的增长,细胞数量减少、增殖能力也下降。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)是一类从脐带胶质中分离出的具有多潜能的成体干细胞,因其来源广泛、易于分离、低免疫原性、无伦理争议等优点逐渐代替骨髓间充质干细胞,成为近年来广泛研究的种子细胞。鞘胺醇-1-磷酸(S1P)是鞘胺醇在鞘胺醇激酶作用下产生的磷脂信号分子。S1P通过结合5种G蛋白偶联受体(S1PR1-5)激活下游的一系列信号途径,调节细胞的增殖、迁移、凋亡等多种生物功能。我们前期研究结果证实,S1P能促进hU-MSCs的增殖并且不引起细胞分化。这对干细胞移植治疗中出现的种子细胞生长缓慢,存活率低等现象具有良好的应用前景。此外,S1P作为磷脂小分子,无免疫原性及异体排斥作用,对开发无血清培养基有潜在的应用价值。本文旨在探讨鞘胺醇-1-磷酸及其受体对人脐带间充质干细胞生存的影响。首先用排瓶法分离培养hU-MSCs,结合细胞形态和细胞表面标记物的检测来鉴定hU-MSCs。Real time PCR法检测hU-MSCs中5种S1P受体的表达谱,发现S1PR2优先农达。MTT法检测S1P对hU-MSCs的增殖作用,发现S1P能促进细胞增殖。Micro chemotoxic chamber法检测不同浓度S1P对hU-MSCs的迁移作用,发现S1P能抑制hU-MSCs迁移并呈剂量依赖关系。最后用S1PR2拮抗剂JTE-013进一步探讨S1P通过S1PR2抗hU-MSCs的凋亡并促进细胞生存。
【关键词】：人脐带间充质干细胞(hU-MSCs) 鞘胺醇-1-磷酸受体2(S1PR2) 凋亡 增殖 迁移
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 英文缩略表10-11
• 前言11-13
• 1 实验材料13-16
• 1.1 主要试剂13-14
• 1.2 实验器材14
• 1.3 常用溶液的配制14-16
• 2 实验方法16-28
• 2.1 人脐带间充质干细胞的分离和培养16-18
• 2.1.1 hU-MSCs的分离16
• 2.1.2 hU-MSCs的传代16-17
• 2.1.3 hU-MSCs的冻存17-18
• 2.1.4 hU-MSCs的复苏18
• 2.2 人脐带间充质干细胞生物学特性鉴定18-19
• 2.2.1 hU-MSCs形态学观察18
• 2.2.2 hU-MSCs标准曲线的制作18-19
• 2.2.3 hU-MSCs生长曲线的制作19
• 2.2.4 流式细胞仪检测hU-MSCs的细胞表面标记物19
• 2.3 人脐带间充质干细胞中检测S1P受体mRNA的表达谱19-24
• 2.3.1 培养hU-MSCs提取细胞总RNA19-20
• 2.3.2 去除总RNA中的基因组DNA20
• 2.3.3 获得hU-MSCs的cDNA模板20-21
• 2.3.4 Real Time PCR检测正常条件下hU-MSCs中S1PRs的mRNA表达谱21-23
• 2.3.5 Real Time PCR检测S1P刺激后hU-MSCs中S1PRs的mRNA表达谱23-24
• 2.4 S1P对人脐带间充质干细胞生物功能的影响24-27
• 2.4.1 MTT法检测S1P对hU-MSCs的增殖作用24
• 2.4.2 Micro chemotoxic chamber法检测S1P对hU-MSCs迁移功能的影响24-25
• 2.4.3 MTT法检测脂多糖(LPS)对hU-MSCs的诱导凋亡作用25-26
• 2.4.4 S1P对脂多糖(LPS)诱导的hU-MSCs有抗凋亡作用26-27
• 2.4.5 检测S1PR2拮抗剂(JTE-013)对hU-MSCs抗凋亡的作用27
• 2.5 统计学处理27-28
• 3 实验结果与分析28-39
• 3.1 人脐带间充质干细胞的分离与鉴定28-32
• 3.1.1 hU-MSCs形态学观察28-30
• 3.1.2 hU-MSCs标准曲线的绘制30
• 3.1.3 hU-MSCs生长曲线的绘制30-31
• 3.1.4 hU-MSCs表面标记物的检测31-32
• 3.2 人脐带间充质干细胞中S1P受体的mRNA表达谱32-34
• 3.2.1 正常条件下hU-MSCs中5种S1PRs的mRNA表达量32-33
• 3.2.2 S1P刺激后hU-MSCs中5种S1PRs的mRNA表达量33-34
• 3.3 S1P对人脐带间充质干细胞生物功能的影响34-39
• 3.3.1 S1P促进hU-MSCs的增殖34
• 3.3.2 S1P抑制hU-MSCs的迁移34-36
• 3.3.3 脂多糖(LPS)诱导hU-MSCs的凋亡36-37
• 3.3.4 S1P抑制LPS诱导的hU-MSCs凋亡作用37-38
• 3.3.5 S1PR2拮抗剂抑制S1P诱导的hU-MSCs增殖作用38-39
• 4 讨论39-41
• 5 结论41-42
• 文献综述42-47
• 参考文献47-50
• 致谢50

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陈淑华;闾宏伟;;S1P及其受体在心血管系统中的作用[J];中国老年学杂志;2013年17期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人脐带间充质干细胞凋亡及其分子机理[D];内蒙古大学;2013年

  本文关键词：鞘胺醇-1-磷酸（S1P）及其受体对人脐带间充质干细胞生存的影晌，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：279243