白藜芦醇对早发性卵巢功能不全模型大鼠激素水平影响及作用机制研究

发布时间：2020-08-17 20:26

【摘要】：目的观察白藜芦醇对实验性早发性卵巢功能不全大鼠抗苗勒管激素、黄体生成素、卵泡刺激素、雌二醇、丙二醛和超氧化物歧化酶水平及卵巢组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响,探讨其作用机制。方法将90只5周龄SPF级SD健康雌性大鼠按随机数字表法随机分为低剂量白藜芦醇灌胃治疗组(a组18只)、中剂量白藜芦醇灌胃治疗组(b组18只)、高剂量白藜芦醇灌胃治疗组(c组18只)、模型对照组(d组18只)、空白对照组(e组18只)。空白对照组从造模前的动物中随机抽取;低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、模型对照组从成功造模(72只每天给予雷公藤多苷片50mg/kg共灌胃14天根据观测指标确定早发性卵巢功能不全成模)的动物中随机分组获得。低剂量、中剂量、高剂量治疗组分别采用每日20mg/kg、40mg/kg、80mg/kg灌胃剂量,模型对照组采用0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。ELISA法检测大鼠血清性激素:抗苗勒管激素(AMH)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平和血清中丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。HE染色镜检大鼠单位卵巢面积内成熟卵泡、闭锁卵泡和黄体数。同时采用免疫组化法比较各组卵巢组织中p-Akt、p-m TOR、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白含量表达差异。Western-blot法比较各组卵巢组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白含量的表达差异。结果不同浓度白藜芦醇灌胃治疗组大鼠较模型对照组大鼠血清中AMH、E2和?SOD水平高(P0.05),LH、FSH和MDA水平低(P0.05);卵巢组织中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、Bcl-2蛋白含量表达高(P0.05),Bax和Caspase-3蛋白含量表达低(P0.05)。不同浓度白藜芦醇灌胃治疗组大鼠较空白对照组大鼠血清中AMH、E2和SOD水平低(P0.05),LH、FSH和MDA水平高(P0.05);卵巢组织中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、Bcl-2蛋白含量表达低(P0.05),Bax和Caspase-3蛋白含量表达高(P0.05)。与低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、空白对照组比较,模型对照组组卵巢内颗粒细胞层数,成熟卵泡数以及黄体数量少(P0.05),闭锁卵泡数明显增加(P0.05)。结论1、经白藜芦醇灌胃治疗后早发性卵巢功能不全的大鼠血清中AMH、E2和SOD水平升高,LH、FSH和MDA水平降低,卵巢内颗粒细胞层数、成熟卵泡数以及黄体数量明显增加,闭锁卵泡数量减少,早发性卵巢功能不全的大鼠卵巢功能有所改善。2、经白藜芦醇灌胃治疗后早发性卵巢功能不全的大鼠卵巢组织中p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、Bcl-2蛋白含量表达高,Bax和Caspase-3蛋白含量表达低。白藜芦醇激活了PI3K/Akt/m TOR信号通路并抑制了颗粒细胞凋亡。3、白藜芦醇对早发性卵巢功能不全大鼠的治疗效果是通过激活PI3K/Akt/m TOR信号通路和抗氧化应激机制,发挥抑制颗粒细胞凋亡的作用。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R285.5;R-332
【图文】：

计量资料,白藜芦醇,体重变化,单因素方差分析

按 ECL 试剂盒说明书的方法混合后避光显影。条带最ro Plus6.0 软件进行灰度值测定。计学方法数据采用 SPSS19.0 软件进行系统的统计学分析。其中计量资料用x ±s）的形式表示，多组间用单因素方差分析进行比较，组间两法，以 P<0.05 为差异具有统计学意义。结果鼠体重变化对照组大鼠体重相对空白对照组、白藜芦醇灌胃治疗组（低、中、，但差异无统计学意义（图 1）。

照片,卵巢,闭锁卵泡,黄体

三、卵巢形态及 HE 染色镜检结果白藜芦醇治疗组大鼠于第 9 周末在动情周期间期麻醉取卵巢，模型对照组与空白对照组大鼠也在动情周期间期取卵巢。与低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、空白对照组比较，肉眼观察，模型对照组卵巢体积有所减小（图 2）。各组均取右侧卵巢，4μm 连续切片，每间隔 10 张留取 1 张切片(即第 11 张)，HE染色镜检，低倍视野拍一个整体照片，每张切片随机选取 5 个高倍视野，计数其中的成熟卵泡、闭锁卵泡及黄体数；应用 Image-Pro Plus 6.0 图像分析软件计算该视野下的面积；算出单位面积内的成熟卵泡、闭锁卵泡及黄体数。与低剂量治疗组、中剂量治疗组、高剂量治疗组、空白对照组比较，模型对照组发现卵巢内颗粒细胞层数，成熟的卵泡数以及黄体数相对变少，而闭锁卵泡数显著增多（图3）。五组大鼠单位卵巢面积中成熟卵泡数、闭锁卵泡数和黄体数（表 5）。a b c d e

卵巢组织,HE染色,镜检,闭锁卵泡

模型对照组发现卵巢内颗粒细胞层数，成熟的卵泡数以及黄体数相对变少，而闭锁卵泡数显著增多（图3）。五组大鼠单位卵巢面积中成熟卵泡数、闭锁卵泡数和黄体数（表 5）。a b c d e图 2 卵巢大体组织注：a：低剂量治疗组卵巢组织；b：中剂量治疗组卵巢组织；c：高剂量治疗组卵巢组织；d：模型对照组卵巢组织；e：空白对照组卵巢组织。图 3 卵巢组织 HE 染色镜检结果注：示闭锁卵泡；示成熟卵泡；示黄体。a：低剂量治疗组卵巢组织 HE 染色镜检（×40）；b：中剂量治疗组卵巢组织 HE 染色镜检（×40）；c：高剂量治疗组卵巢组织 HE

【参考文献】