HBcAg重组腺病毒转染人PBMCs对TLR9和IRF7表达的影响

发布时间：2020-08-22 17:20

【摘要】：目的：采用腺病毒为载体将HBcAg基因负载正常人和慢性HBV携带者外周血单个核细胞(PBMCs),检测转染前后TLR9,IRF7表达情况,IFN-a产生水平,以了解慢性HBV感染者免疫识别状态的变化。方法：构建携带HBcAg基因复制缺陷型的重组腺病毒,将其转染正常人和慢性HBV携带者PBMCs,按分组予高拷贝HBV-DNA血清和(或)CpG-ODN2006刺激,RT-PCR方法检测转染前后TLR9,IRF7mRNA表达,Western-Blot方法检测TLR9,IRF7蛋白表达,Elisa方法检测培养液中的IFN-a水平。结果： ①RT-PCR结果显示转染前慢性HBV携带组TLR9,IRF7mRNA的表达低于健康正常者(P0.05),其中,转染前予CpG-ODN2006刺激后HBV携带者和健康正常者TLR9,IRF7mRNA表达未有显著上升(P0.05)；转染后予CpG--ODN2006刺激HBV携带者和健康正常者较转染前TLR9,IRF7mRNA表达有显著增强,差异有统计学意义(P0.05) ②与TLR9,IRF7mRNA表达一致,Western-Blot结果显示转染后健康正常者予各刺激后较转染前TLR9,IRF7蛋白表达增强,差异具有统计学意义(P0.05),慢性HBV携带者转染后较转染前TLR9,IRF7蛋白表达增强,差异有统计学意义(P0.05)。 ③Elisa结果显示转染前后慢性HBV携带组IFN-α产生水平低于健康对照组(P0.05,P0.05),健康正常者及慢性HBV携带者转染后培养上清IFN-a产生水平较转染前明显增强,差异有统计学意义(P0.05)。结论： ①转染前慢性HBV感染者PBMCs TLR9,IRF7mRNA及蛋白表达,IFN-a产生水平显著低于健康正常者,提示慢性HBV感染者PBMCs识别HBV核酸DNA能力下降,不能有效激活IRF7,不能分泌足量的IFN-α清除病毒造成慢性持续感染可能； ②Ad-HBcAg转染慢性HBV携带者PBMCs后IFN-a产生水平低于健康对照组转染后IFN-a产生水平,提示HBV持续感染与PBMCs免疫功能下降有关； ③Ad-HBcAg转染PBMCs后TLR9,IRF7mRNA及蛋白的表达及IFN-α的分泌水平较未转染前增强证实了TLR9为胞内受体,予胞内刺激可产生较强的抗HBV免疫； ④转染后CpG-ODN可激活慢性HBV携带者PBMCs中TLR9,IRF7的表达,同时增强IFN-α的分泌,提示可通过采用CpG-ODN发挥机体固有免疫抗HBV感染。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R363
【图文】：

转染,表达水平,高拷贝,血清

组、高拷贝HBv一DNA血清+cpG组之间未见有显著性差异(P二 0.186);转染后空白对照组，高拷贝HBv一DNA血清+cpG组之间未见有显著性差异(P=0.193)。(见图3、表l)M700叹700bp\400bPesse卜Zoobp~1。。bp尸40ObPwe卜200bPes月卜loobp尸(转染前)(转染后)图3健康正常者转染前后 PBMCsTLRgmRNA表达水平1:空白对照组;2:HBV-DNA高拷贝血清组;3:CpG加06组;4:HBv-DNA高拷贝血清+CPGZOO6组;M:Mark表一健康正常者转染前后 PBMCsTLRgmRNA表达水平(X士s)HBV-DNA分组空白对照组高拷贝血清组CPG2006高拷贝血清+CpGZO06组转染前转染后 0.74士0.09 0.88士0.11“ 0.57士0.15 0.70士0.10a 0.73士0.100.86士0.14a 0.85士0.09 0.91士0.11“TLRgmRNA:与转染前比较aP<0.05

转染,表达水平,高拷贝,血清组

(转染前)(转染后)图4慢性HBV感染者转染前后PBMCsTLRgmRNA表达水平表二慢性HBV感染者转染前后PBMCsTLRgmRNA表达水平(X士s)HBV-DNA分组空白对照组CPG组转染前转染后0.68士0.12b0.83土0.02ac高拷贝血清组0.3]士0.070.54士0.O6ac0.59士0.llb0.95士0.03a高拷贝血清+CPG组0.53士0.16b0.75士0.10ac注:与转染前比较，aP<0.05;与HBv一DNA高拷贝血清组比较，丫<0.05;与cpG组比较，cP<0.03.4WesternB1ot分析转染前后PBMCsTLRg表达水平1、健康正常者转染前后TLRg蛋白表达健康正常者转染后空白对照组，高拷贝HBv~DNA血清组，cpG组，高拷贝HBV一DNA血清+CpG组TLRg

转染,表达水平,高拷贝,血清

第3章结果1、健康正常者转染前后IRF7mRNA表达与转染前比较，健康正常者转后各组IR王7mRNA表达上调，差异具有统计学意义(t=一2.439，p=0.025t一2.435，p一0.026;卜一2.715，p一0.014;卜一2.776，p=0.012)。转染前健康正常者各比较无显著性差异(P=0.155);转染后高拷贝HBV一DNA血清组，CpG组，拷贝HBV一DNA血清+CpG组之间未见有显著性差异(P=0.401)。2、慢性HBV携带者转染前后IRF7mRNA表达与转染前比较，慢性H携带者转染后空白对照组，高拷贝HBV一DNA血清组IRF7mRNA表达水平均显著上升，差异有统计学意义(t=一6.164，P二0.000;t=一6.121，p一0.000);转染后C组，高拷贝HBv~DNA血清+CpG组较转染前表达增强，但无统计学意(t=一0.359，p一0.000;护一0.359，P一0.724);慢性HBV携带者转染前后各组(各间F=16.668，F=7.093)，转染前慢性HBV携带者CpG组、高拷贝HBv一D血清+CpG组之间未见有显著性差异(P=0.593);转染后高拷贝HBV-DNA血CPG组，高拷贝HBV一DNA血清+CpG组之间未见有显著性差异(P=0.135)

【参考文献】