microRNA-7在炎症性肠病动物模型中对肠黏膜保护因子TFF3的调控作用研究

发布时间：2020-09-14 16:38

　　目的:本研究试图探索IBD幼鼠模型中miR-7、TFF3基因及蛋白的表达情况及相关性,且试图通过抑制miR-7的表达观测TFF3的表达情况,阐明mi R-7在IBD动物模型中对肠黏膜保护因子TFF3的调控作用。研究方法:本研究选用60只生后3-4周的雄性SD大鼠,完全随机分为模型组、对照组及正常对照组,应用TNBS建立炎症性肠病幼鼠模型,观测各组幼鼠临床表现,进行疾病活动指数评分,通过HE染色观察肠道炎症改变并进行结肠组织损伤评分,证实结肠炎存在,采用Real-time RT-PCR方法检测mi R-7与TFF3基因的表达情况,探索miR-7和TFF3在IBD幼鼠模型结肠组织中表达的差异性和相关性;选用40只生后21天的Balb/c小鼠,随机分为模型组、对照组、miR抑制组及rTFF3干预组,应用TNBS建立IBD模型,以miRNA-antagomir抑制miR-7的表达,并以rTFF3作为阳性对照,通过比较各组幼鼠结肠组织损伤程度、mi R-7和TFF3基因的表达情况及肠组织中TFF3蛋白的表达情况,明确miR-7对TFF3的调控作用。结果:TNBS诱导的IBD幼鼠在造模后出现体重明显下降,疾病活动指数及病理损伤评分显著升高,并且随着时间的改变体重先降后升,DAI和病理评分呈先高后降的趋势,与正常对照组相比差异有统计学意义。Real-time RT-PCR结果表明IBD幼鼠结肠组织中miR-7高表达,TFF3低表达,且随着时间的改变miR-7的表达逐渐降低,TFF3的表达逐渐增强,二者之间负相关,抑制miR-7的表达后可以上调TFF3表达水平。免疫组化及Western Blot结果提示IBD幼鼠肠组织中TFF3蛋白的表达量显著降低,抑制miR-7的表达后TFF3蛋白的表达量显著升高,与对照组和rTFF3干预组相比有统计学差异。结论:1、IBD动物模型中miR-7高表达,TFF3低表达,且随着时间的进展miR-7的表达逐渐降低,TFF3的表达逐渐增强,二者呈负相关。2、抑制miR-7的表达后,肠组织TFF3基因及蛋白表达增加,证实miR-7对TFF3的转录后调控作用。
【学位单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R574;R-332
【部分图文】：

幼鼠,体重,血便,模型

3.1 TNBS 诱导 IBD 幼鼠模型的成功建立3.1.1 TNBS 诱导 SD 大鼠幼鼠 IBD 的临床表观评估造模前：幼鼠进食水正常，毛色光洁干净，喜自主活动，大小便正常，粪便性状正常，黄褐色，呈椭圆形。造模后：TNBS 组幼鼠出黏液血便或稀便，肛周污秽，与正常粪便差别明显；动物自主活动少，喜贴边扎堆，食欲减退，倦怠懒动。IBD 幼鼠出现腹泻及血便等临床表现，体重下降，到造模后第 3 天开始出现体重增长，但增长幅度明显低于 NS 组和 Ethanol 组（图 1A，p＜0.05，差异具有统计学意义）。随着体重下降、血便等出现，幼鼠的疾病活动指数（DAI）急剧上升，随着病程的进展，TNBS 组幼鼠临床症状逐渐缓解，DAI 指数开始出现下降，而 NS 组和 Ethanol 组的 DAI 评分均低于 TNBS 组，到造模第 7 天三组幼鼠的 DAI基本相同（图 1B，p＜0.05，差异具有统计学意义）。

幼鼠,血便,自主活动,体重下降

病理改变,幼鼠,肠上皮,隐窝

图 3 IBD 大鼠幼鼠结肠组织病理改变随时间变化（HE ×100）图中 A 代表 TNBS 组造模后第 1 天，B 代表 TNBS 组造模后第 3 天，C 代表 TNBS 组造模后第 5 天，D 代表 TNBS 组造模后第 7 天，图中各组数据均以均数标准误表示（n=5），*表示P<0.05，有统计学意义。3.2 miR-7 对 TFF3 的调控作用3.2.1 幼鼠结肠组织病理学改变光镜下观察幼鼠结肠组织，TNBS 组的幼鼠结肠表现出明显肠道炎症，肠上皮及隐窝结构破坏甚至消失，大量的炎性细胞浸润，病变深及粘膜和粘膜下层；miR抑制组结肠组织可见肠上皮基本完整，隐窝结构恢复正常或轻度损害，伴有大量的杯状细胞增生，少有肠黏膜上皮细胞的缺失，可见有散在的炎症细胞浸润；rTFF3干预组肠上皮恢复正常，仍可见有炎症细胞聚集和隐窝损害，经单因素方差分析统计，各组幼鼠病理学评分差异有统计学意义（图 4，P＜0.05），TNBS 组病理评

【参考文献】