抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）天然产物的筛选及研究

发布时间：2020-09-27 19:15

　　金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起化脓性感染和医院感染的常见病原菌,由于细菌本身的进化和药物的滥用导致其耐药性逐渐增强,特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)严重影响人类健康,如何防治已成为全球关注的焦点。MRSA具有多重耐药的特性,对目前绝大多数的抗菌药耐药,甚至对目前临床最为有效的万古霉素也开始出现耐药,一旦MRSA发展到对万古霉素普遍耐药,MRSA感染患者将面临无药可治的危险境地,因此研究开发新的抗MRSA药物具有重大意义。中药中蕴藏着多种有效成份,天然化合物极具结构复杂性和多样性,是开发新药的一个巨大宝藏,也是我国新药开发的一个优势所在。许多中药都具有抗菌活性,如板蓝根、穿心莲、溪黄草、黄柏和鱼腥草等,其单体成分如小檗碱、大黄素、穿心莲内酯和去氢贝母碱是其抗菌活性成分等。多种耐药菌对中药的抗菌物质仍然敏感,提示中药在耐药菌株的治疗方面也有明显优势。本课题对几十种中草药提取物和中药单体进行了较为系统的研究,并对抗MRSA活性较强的中草药和中药单体进行了深入研究,旨在寻找到新的抗MRSA活性成分,为开发新的抗MRSA药物提供理论依据和实验基础。课题分为三个部分：一、对23种中草药提取物的抗MRSA活性进行了筛选采用96孔板法初步测定了23种中草药水提物和醇提物的抗MRSA活性,从中筛选出8种具有较强抗MRSA活性的中草药,分别为仙鹤草、蒲公英、夏枯草、半枝莲、侧柏叶、桑叶、木瓜、大血藤,且抑菌效果与浓度呈正相关性。进一步测定了这8种中草药提取物对11株MRSA的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),其中仙鹤草水提取物和醇提物抗MRSA活性最强,其MIC和MBC的生药浓度均为6.25mg.mL-1。二、对33种中药单体的抗MRSA活性进行了研究采用96孔板法测定了33种中药单体对MRSA的抗菌活性,从中发现10种中药单体对MRSA具有抑制活性,分别为花旗松素、黄芩素、二氢杨梅素、原花青素、没食子酸、姜黄素、熊果酸、白秋李醇、水飞蓟宾、芦竹碱、杨梅苷,其MIC分别为50μg.mL-1、50gg.mL-1、1O0μg.mL1、1OOgg.mL"1、200gg.mL-1、400μg.mL-1、400μg.mL-1、400μg·mL-1、400μg.mL-1、400μg.mL-1、400μg.mL-1、800μg.mL-1。同时我们进一步研究了花旗松素、二轻杨梅素、原花青素3种抑菌作用相对较强的中药单体对常见抗菌素的增敏作用,实验结果结果表明这3种中药单体对氧氟沙星、头孢西丁钠、氯霉素、头孢唑啉钠等4种常见抗菌素的抗MRSA活性无显著的增敏作用。三、仙鹤草提取物抗MRSA有效成分的深入研究采用溶剂分离和柱层析相结合的方法对仙鹤草醇提物进行了分离,采用96孔板法逐步验证分离物的活性,结果石油醚萃取部分经硅胶柱层析(乙酸乙酯：石油醚=7：3洗脱),分得5个有较强抗MRSA活性的成分。通过实验确证了水提物中抗MRSA活性物质为鞣质,并对仙鹤草中鞣质的提取和纯化工艺进行了初步研究。本课题从中草药及中药单体入手进行了较为系统的抗MRSA活性物质筛选,得到了一些有价值的结果,为后续进一步的研究奠定了基础。研究结果也表明,许多中草药中的确含有抗MRSA活性物,但如何分离纯化得到抗菌效果好的活性物质,是下一步研究的重点和难点。
【学位单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R378
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章文献综述
第二章绪论
    2.1 研究目的和意义
    2.2 研究内容和范围
第三章实验材料与方法
    3.1. 实验材料
        3.1.1 菌株来源
        3.1.2 中草药、中药单体来源
        3.1.3 单体、血平板、培养基及药敏纸片来源
        3.1.4 常用试剂
        3.1.5 主要仪器
    3.2. 实验方法
        3.2.1 实验总体路线
        3.2.2 临床菌株的鉴定
        3.2.3 23种中草药对MRSA的抗菌活性研究
        3.2.4 33种中药单体对MRSA的抗菌活性研究
        3.2.5 仙鹤草抗MRSA成分的初步研究
第四章研究结果与分析
    4.1 临床菌株菌株鉴定结果
    4.2 23种中草药对MRSA的抗菌活性研究结果
    4.3 33种中药单体对MRSA的抗菌活性研究结果
        4.3.1 33种单体的抑菌性分析
        4.3.2 中药单体对抗菌药物的增敏作用
        4.3.3 三种中药单体对常见抗菌药的增敏实验结果
    4.4 仙鹤草醇提物中抗MRSA活性成分研究
    4.5 仙鹤草水提物中抗MRSA活性成分研究
    4.6 鞣质提取工艺初步研究结果
        4.6.1 鞣质含量测定方法的建立
        4.6.2 标准曲线的制备
        4.6.3 鞣质的提取及纯化工艺的单因素考察
第五章结论与建议
参考文献
致谢
在学期间所发表的文章

【参考文献】