大鼠脊髓突触体的制备及其神经递质的定性定量分析研究

发布时间：2020-09-27 18:40

　　 目的:本研究制备S-D大鼠的脊髓突触体,并对大鼠脊髓突触体中神经递质进行定性、定量分析研究。方法:本实验使用不连续性Percoll密度梯度离心的方法去提取大鼠脊髓的突触体,然后在透射电镜下观察大鼠脊髓突触体的形态及其结构。采用超高效液相色谱-质谱联用法对大鼠脊髓突触体中神经递质进行测定。结果:本研究制备的大鼠脊髓突触体,呈一形态结构完整且具有膜结构的椭圆形颗粒,其中包含有突触小泡、线粒体、细胞浆等。检测出大鼠脊髓突触体中含有多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、3-甲氧酪胺(3-MT)、3-羟基-2-氨基苯甲酸(3-HAA)、5-羟色胺(5-HT)、高香草酸(HVA)、r-氨基丁酸(GABA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)、色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)、3-羟基犬尿氨酸(3-HK)等神经递质。结论:不连续性Percoll密度梯度离心法能制备出大鼠脊髓突触体,并可用液相色谱-质谱法检测出大鼠脊髓突触体中所含神经递质及其相关代谢产物,说明脊髓突触体具有生理活性。
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R338
【部分图文】：

图 1 S-D 脊髓脊髓突触体制备简图图 2 percoll 密度梯度离心分层.2.2 样品前处理将提取的脊髓突触体吸入 1.5mL 的 EP 离心管；依次加入适量的萃取液甲醇的混合物，按 1:3 混合）和 50μL 混合内标应用液；以 Tissuelyser 仪均质化，均质化条件：利用不锈钢珠以 30Hz 的频率震动 3 min，反复 3 后在 4℃条件下，15000r/min 离心 15min；提取上清液入 1.5mL EP 离心管

percoll 密度梯度离心分层.5mL 的 EP 离心管；依次加入和 50μL 混合内标应用液；以锈钢珠以 30Hz 的频率震动 3离心 15min；提取上清液入 1.5中加入 50μL 的碳酸氢钠（p/mL），旋转 1min 使其混合均溶液 18000rpm 高速冷冻离心 1瓶中，进样 5μL 上机测定。腈中加入 0.1%的甲酸配制为

大鼠脊髓突触体电镜图

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本文编号：2828226