P2X4过表达对帕金森病模型大鼠脑内凋亡蛋白酶的作用
发布时间：2020-10-12 18:32
背景及目的:帕金森氏病(Parkinson’s Disease,PD)作为患病率仅次于老年性痴呆(Alzheimer’s Disease,AD)的神经退行性疾病,发病机制目前尚不明了。在既往研究中,认为是环境因素、遗传因素、衰老、氧化应激、线粒体功能衰竭、钙超载等多种因素协同作用的结果。近来,神经免疫炎症机制在PD发病中的作用受到了研究者们的广泛关注。对相关信号通路调控机制的研究,对阐明PD发病机制具有重要意义,可以为PD的防治提供方向,而ATP-P2X4R信号轴介导NLRP3炎性小体活化就是这些关键通路之一。明确ATP-P2X4R信号轴介导的神经免疫炎症机制在PD发病中的作用,过表达P2X4R基因可能通过上调P2X4R介导的信号通路的表达,增强PD的炎性反应,对DA能神经元的损伤作用增强,从侧面证明抑制P2X4R介导的炎性通路对PD的保护作用。探讨过表达P2X4基因对6-OHDA诱导的帕金森病(PD)大鼠模型中凋亡蛋白酶caspase-1表达的影响。揭示P2X4对PD发病机制等作用,为PD的防治提供一个新靶点。方法:120只体重约200-250g Wistar雄性大鼠随机分为6组:6-OHDA组;对照组;目的基因(RNA-P2X4)+6-OHDA组;单纯目的基因(RNA-P2X4)组;阴性病毒(P2X4-NC)+6-OHDA组;单纯阴性病毒(P2X4-NC)组。携带空载RNA的P2X4-NC慢病毒与上调P2X4表达的目的RNA-P2X4慢病毒经脑立体定位仪定向注射于大鼠左侧黑质,根据分组情况经脑立体定位仪于大鼠左侧黑质定向注射6-OHDA(8ug/2ul)或等量生理盐水(仅含0.2%抗坏血酸2ul)。模型建立后采用腹腔注射APO诱发旋转实验观察大鼠行为学变化,筛选成功PD大鼠。4周后予大鼠断头取脑,利用免疫组织荧光染色法检测各组大鼠脑组织黑质中TH阳性DA神经元数量变化情况,采用Western blot检测各组P2X4R蛋白、NLRP3蛋白、caspase-1蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测各组P2X4R、NLRP3、caspase-1 m RNA表达水平变化。结果:与P2X4-NC+6-OHDA组比较,RNA-P2X4+6-OHDA组P2X4R(1.099±0.05569vs 0.7821±0.02008,P(27)0.001)、NLRP3(0.9875±0.01932 vs 0.6645±0.01747,P(27)0.001)、caspase-1(0.9948±0.01788 vs 0.8276±0.04543,P(27)0.001)蛋白表达量均显著升高,差异有统计学意义。结论:在PD动物模型中,P2X4基因过表达可提高PD多巴胺能神经元模型中caspase-1蛋白表达水平,促进凋亡反应,有潜在的神经损害作用。P2X4在PD发生发展中发挥重要作用。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R742.5;R-332
【部分图文】：
图 1 携带目的基因或空载慢病毒在大鼠左侧黑质中的分布情况Fig. 1 Expression of target gene or empty lentivirus in left substantia nigra DA neurons in ra（A：TH 阳性多巴胺能神经元；B：携带目的基因或空载的慢病毒；C：携带目的基载慢病毒在 DA 神经元中表达）(A:TH positive dopaminergic neurons; B: Expression of target gene or empty lentivirus
图 2 各组大鼠 DA 神经元计数Fig. 2 The number of DA neurons in each group 对照组；B 6-OHDA 组；C RNA-P2X4 组；D RNA-P2X4+6-OH4-NC 组；F P2X4-NC+6-OHDA 组；1：B vs A，P 0.001；2：D vs F，P the control group, B 6-OHDA group; C RNA-P2X4 group;
图 3 Western blot 法测定 P2X4R 蛋白含量Fig. 3 Determination of P2X4R protein by Western blot（A：对照组；B：6-OHDA 组；C：RNA-P2X4 组；D：RNA-P2X4+6-E：P2X4-NC 组；F：P2X4-NC+6-OHDA 组；1：B vs A，P 0.001；2：D01）
【参考文献】
本文编号：2838118
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R742.5;R-332
【部分图文】：
图 1 携带目的基因或空载慢病毒在大鼠左侧黑质中的分布情况Fig. 1 Expression of target gene or empty lentivirus in left substantia nigra DA neurons in ra（A：TH 阳性多巴胺能神经元；B：携带目的基因或空载的慢病毒；C：携带目的基载慢病毒在 DA 神经元中表达）(A:TH positive dopaminergic neurons; B: Expression of target gene or empty lentivirus
图 2 各组大鼠 DA 神经元计数Fig. 2 The number of DA neurons in each group 对照组；B 6-OHDA 组；C RNA-P2X4 组；D RNA-P2X4+6-OH4-NC 组；F P2X4-NC+6-OHDA 组；1：B vs A，P 0.001；2：D vs F，P the control group, B 6-OHDA group; C RNA-P2X4 group;
图 3 Western blot 法测定 P2X4R 蛋白含量Fig. 3 Determination of P2X4R protein by Western blot（A：对照组；B：6-OHDA 组；C：RNA-P2X4 组；D：RNA-P2X4+6-E：P2X4-NC 组；F：P2X4-NC+6-OHDA 组；1：B vs A，P 0.001；2：D01）
【参考文献】
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本文编号：2838118
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