ITCH泛素化降解TAB2蛋白调控TNF诱导的NF-κB信号通路
发布时间：2020-10-14 14:36
NF-κB信号通路是TNF激活的主要信号通路,总的来说,当TNF作用于细胞时,会引起细胞内三条信号通路。其中,NF-κB信号通路是体内主要的信号通路。三十年转瞬即逝,在全球众多实验室的不懈努力下,NF-κB的研究取得了令人欣喜的进展,它在免疫应答中所起的作用是有目共睹的。在体内,NF-κB积极参与免疫系统众多环节的调控,它在进化上的保守性说明了 NF-κB不可替代的地位。然迄今为止,关于NF-κB信号通路调节方面,仍存在很多尚未解决的问题。众所周知,泛素化是生物体内为了维持正常的秩序而诞生的蛋白质修饰。许多研究表明,泛素化是调控免疫反应的一种重要机制,它在NF-κB信号传导过程中至关重要。[1]试想一下,假如没有泛素化的存在,生命会变得多么糟糕。众人皆知,TAK1在促存活与促死亡方面起着不可动摇的作用。通过对TAK1这个蛋白的研究,我们的目光注意到了 TAK1连接蛋白——TAB2。据我们观察,当TAB2与TAK1二者相互连接的时候,TAB2的蛋白会表达呈显著降低。事先已有文献报导TAB2-TAK1能够相结合,但关于TAK1-TAB1/2/3复合物功能的调控机制还有待研究。在本实验室的其它课题中,我们发现TAB2蛋白与TAK1及其片段共表达时,TAB2蛋白表达水平下降。于是,我们猜想TAB2蛋白水平的下降是否是由于发生泛素化所导致的。在证实TAB2蛋白水平的下降与蛋白酶体有关后,我们继续寻找与TAB2的E3连接酶。通过实验,我们发现TAB2蛋白能够被E3连接酶ITCH泛素化调控。此结果负调控NF-κB信号通路,敦促细胞走向死亡深渊。由于TNF能会导致炎症,而炎症反应又许多自身免疫性疾病有着十分紧密的联系。例如,癌症,心脏病和关节炎等长期困扰人类的疾病,都与炎症的发生息息相关。本论文发现了在TNF刺激的NF-κB信号通路中调控TAK1-TAB1/2/3复合体功能的一种重要机制。我们推测,E3连接酶ITCH能够通过泛素化降解TAB2蛋白,从而负调控于TNF刺激的NF-κB信号通路。倘若,E3泛素连接酶ITCH调控的TAB2蛋白泛素化降解这一步骤受到阻碍。那么,可能会导致TNF过度激活NF-κB,从而使得细胞的生长失去控制,这对生物体的发展有着难以估量的影响。因此,这个新机制的发现,或能助力于临床医疗上找寻新的药物靶点,并且为某些与炎症反应相关疾病开辟新的道路与方向。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R346
【部分图文】：
Ｎｕｃｌｅｕｓ??图１．１?ＴＮＦａ诱导的细胞存活，凋亡和坏死??Ｆｉｇ．１．１?ＴＮＦａ?ｉｎｄｕｃｅｓ?ｃｅｌｌ?ｓｕｒｖｉｖａｌ，?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓ??注：该图引自ＳＲ?Ｍｉｈａ?丨?ｙｅｔ?ａｌ．，ＴＡＫｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ，?２０１４．??．１．２?ＴＮＦ激活ＪＮＫ和ｐ３８?ＭＡＰＫ信号通路??
?－??Ｎｕｃｌｅｕｓ??图１．１?ＴＮＦａ诱导的细胞存活，凋亡和坏死??Ｆｉｇ．１．１?ＴＮＦａ?ｉｎｄｕｃｅｓ?ｃｅｌｌ?ｓｕｒｖｉｖａｌ，?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓ??注：该图引自ＳＲ?Ｍｉｈａ?丨?ｙｅｔ?ａｌ．，ＴＡＫｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ，?２０１４．??１．１．１．２?ＴＮＦ激活ＪＮＫ和ｐ３８?ＭＡＰＫ信号通路??每时每刻，细胞都需要不断地对外界刺激作出应答，并且它们有着一套复??杂的机制来接外界的信号。憐酸化（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）在调控蛋白功能和信号??转导级联反应中最为常见，并在细胞周期，生长以及细胞凋亡中至关重要。磷??酸化之所以被青睐，很大程度上是因为它的发生是很迅速的，并且可以通过去??磷酸化的方式解除信号。磷酸化的重要性早己熟知于众，但由于在本文中不作??重点，所以仅简要的阐述磷酸化过程。磷酸化和大多数修饰与众不同的地方就??在于它的可逆性
—丨曹一Ａ?７７??二龜??Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－４６２－５７９?—１：．．?一丨??Ａｃｔｉｕ?｜—＞—［４３??图３．１?ＴＡＫ１影响ＴＡＢ２蛋白表达下降??Ｆｉｇ．?３．１?Ｔｈｅ?ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＴＡＢ２?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｒｅｌａｔｅｄ?ｔｏ?ＴＡＫ１??注：分别往６个１〇！？１１的细胞培养皿里，接种密度为２乂１０６个细胞／盘的１１￡尺２９３１＇细胞。待达到７５％的??细胞密度时，进行转染■分别（顺序如图，从左往右）（１）转入ｐＣＭＶ－ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ，（２）共转染ｐＣＭＶ－??ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ，（３）ｐＣＭＶ－ＴＡＫｌ－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－１－３２１，（４）?ｐＣＭＶ－ＴＡＫｌ－３ｘＦｌａｇ??和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－３２２－４６１，?（５）?ｐＣＭＶ－ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－４６２－５７９，（６）共转染?ｐＣＭＶ－??ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ和ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ。转染８ｈ后，更换新的ＤＭＥＭ培养基（含１０°／。胎牛血清）。待转染后??２４?ｈ?收集细胞，裂解细胞并跑?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，最后，用?Ａｎｔｉ－Ｍｙｃ?（Ｓａｎｔａ－ｃｒｕｚ）抗体和?Ａｎｔｉ－Ｆｌａｇ?（Ｓｉｇｍａ－Ｍ２）??抗体进行ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析。??３．１．２?ＭＧ１３２处理后ＴＡＢ２蛋白表达升高??为了进一步探宄ＴＡＢ２与ＴＡＫ１结合后，ＴＡＢ２蛋白信号的减弱是否是由于??蛋白降解造成的
【参考文献】
本文编号：2840795
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R346
【部分图文】：
Ｎｕｃｌｅｕｓ??图１．１?ＴＮＦａ诱导的细胞存活，凋亡和坏死??Ｆｉｇ．１．１?ＴＮＦａ?ｉｎｄｕｃｅｓ?ｃｅｌｌ?ｓｕｒｖｉｖａｌ，?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓ??注：该图引自ＳＲ?Ｍｉｈａ?丨?ｙｅｔ?ａｌ．，ＴＡＫｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ，?２０１４．??．１．２?ＴＮＦ激活ＪＮＫ和ｐ３８?ＭＡＰＫ信号通路??
?－??Ｎｕｃｌｅｕｓ??图１．１?ＴＮＦａ诱导的细胞存活，凋亡和坏死??Ｆｉｇ．１．１?ＴＮＦａ?ｉｎｄｕｃｅｓ?ｃｅｌｌ?ｓｕｒｖｉｖａｌ，?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ａｎｄ?ｎｅｃｒｏｐｔｏｓｉｓ??注：该图引自ＳＲ?Ｍｉｈａ?丨?ｙｅｔ?ａｌ．，ＴＡＫｌ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｏｆ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ，?２０１４．??１．１．１．２?ＴＮＦ激活ＪＮＫ和ｐ３８?ＭＡＰＫ信号通路??每时每刻，细胞都需要不断地对外界刺激作出应答，并且它们有着一套复??杂的机制来接外界的信号。憐酸化（Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ）在调控蛋白功能和信号??转导级联反应中最为常见，并在细胞周期，生长以及细胞凋亡中至关重要。磷??酸化之所以被青睐，很大程度上是因为它的发生是很迅速的，并且可以通过去??磷酸化的方式解除信号。磷酸化的重要性早己熟知于众，但由于在本文中不作??重点，所以仅简要的阐述磷酸化过程。磷酸化和大多数修饰与众不同的地方就??在于它的可逆性
—丨曹一Ａ?７７??二龜??Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－４６２－５７９?—１：．．?一丨??Ａｃｔｉｕ?｜—＞—［４３??图３．１?ＴＡＫ１影响ＴＡＢ２蛋白表达下降??Ｆｉｇ．?３．１?Ｔｈｅ?ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＴＡＢ２?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｒｅｌａｔｅｄ?ｔｏ?ＴＡＫ１??注：分别往６个１〇！？１１的细胞培养皿里，接种密度为２乂１０６个细胞／盘的１１￡尺２９３１＇细胞。待达到７５％的??细胞密度时，进行转染■分别（顺序如图，从左往右）（１）转入ｐＣＭＶ－ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ，（２）共转染ｐＣＭＶ－??ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ，（３）ｐＣＭＶ－ＴＡＫｌ－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－１－３２１，（４）?ｐＣＭＶ－ＴＡＫｌ－３ｘＦｌａｇ??和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－３２２－４６１，?（５）?ｐＣＭＶ－ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ?和?ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ－４６２－５７９，（６）共转染?ｐＣＭＶ－??ＴＡＢ２－３ｘＦｌａｇ和ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ－ＴＡＫｌ。转染８ｈ后，更换新的ＤＭＥＭ培养基（含１０°／。胎牛血清）。待转染后??２４?ｈ?收集细胞，裂解细胞并跑?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，最后，用?Ａｎｔｉ－Ｍｙｃ?（Ｓａｎｔａ－ｃｒｕｚ）抗体和?Ａｎｔｉ－Ｆｌａｇ?（Ｓｉｇｍａ－Ｍ２）??抗体进行ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析。??３．１．２?ＭＧ１３２处理后ＴＡＢ２蛋白表达升高??为了进一步探宄ＴＡＢ２与ＴＡＫ１结合后，ＴＡＢ２蛋白信号的减弱是否是由于??蛋白降解造成的
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 ;Molecular mechanism of TNF signaling and beyond[J];Cell Research;2005年01期
本文编号：2840795
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/2840795.html
