含溴结构域蛋白抑制剂JQ1通过HSP90-CDC37-CDK9复合物调控潜伏HIV转录激活的机制研究
发布时间：2020-10-16 11:30
获得性免疫缺陷综合症(Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS),也称艾滋病,是感染人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)而引起的一种全身免疫系统严重损害的传染性疾病。目前,临床上运用的HARRT疗法,因为潜伏病毒库的存在,使其不能彻底地清除体内的HIV病毒。“Shock and Kill”策略旨在先通过潜伏激活剂活化隐藏于潜伏库中的HIV,再结合HARRT疗法,实现HIV感染者的彻底治愈。针对已发现的HIV潜伏形成机制,作用于不同途径和不同靶点的潜伏激活剂(Latency reversing agents,LRAs)正在被逐渐地发现与研究,例如组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA、蛋白激酶C调节剂Prostratin和含溴结构域蛋白抑制剂JQ1等化合物。本课题发现在含溴结构域蛋白抑制剂JQ1诱导潜伏HIV转录激活过程中,HSP90-CDC37-CDK9复合物发挥重要的调控功能。其中主要的研究内容包括以下几点:(1)通过定量蛋白质组学SILAC技术发现JQ1处理会使得更多的HSP90-CDC37复合物与CDK9结合;(2)使用不同浓度和不同时间的JQ1处理后,再结合免疫共沉淀等实验方法,验证HSP90-CDC37复合物与CDK9结合增加具有时间和浓度依赖性特征;(3)使用不同结构的含溴结构域蛋白抑制剂iBET-151同样地促进CDK9募集更多的HSP90-CDC37复合物;(4)抑制CDK9活性、HSP90活性、敲低HSP90以及敲低CDC37后,下调JQ1诱导的潜伏HIV基因表达;(5)HSP90-CDC37-CDK9复合物结合的稳定性为JQ1刺激潜伏HIV基因转录作用所需;(6)抑制HSP90活性以及降低CDC37表达量后,通过非活化状态7SKsnRNP复合物的重新组装,使更多的CDK9处于无活性状态,从而降低JQ1激活潜伏HIV基因表达的活性;(7)JQ1促进热休克因子HSF1与HIV-LTR区域结合,并使HSF1募集更多的HSP90-CDK9复合物参与其逆转潜伏HIV病毒转录的作用。本课题研究JQ1通过HSP90-CDC37-CDK9复合物调控潜伏HIV基因转录的过程,不仅为JQ1作用机制的完整性提供了强有力地证据,而且为潜伏激活剂通过多途径多靶点发挥作用提供理论基础,从而对临床研究具有重要的科学意义和应用价值。
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R373
【部分图文】：
处于活化的状态，并且与作为通用转录因子的含溴结构域蛋白Ｂｒｄ４??（Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎ４）相结合，之后被Ｂｒｄ４上调转录活性，増强其对ＲＮＡ??聚合酶ＩＩ?ＣＴＤ的识别与结合（见图１．１）。Ｂｒｄ４是与ＣＤＫ９的第１７５位丝氨酸、??ＣｙｃｌｉｎＴｌ的４２６？５１６的氨基酸直接结合，募集Ｐ－ＴＥＦｂ到转录复合体中，从而调??节转录延伸［４７］。当敲低Ｂｒｄ４的表达量后，发现细胞内ＲＮＡ聚合酶ＩＩ?ＣＴＤ的第??二位丝氨酸磷酸化程度降低，以及７ＳＫｓｎＲＮＰ中结合的Ｐ－ＴＥＦｂ增加，而运用一??些外界的刺激因素处理细胞后，ＨＥＸＩＭ１、ＬＡＲＰ７等负性因子和Ｐ－ＴＥＦｂ从非活??性的７ＳＫｓｎＲＮＰ复合物中解离出来，同时使Ｐ－ＴＥＦｂ与Ｂｒｄ４的结合增加，刺激??转录的延伸［４８］。??ｔｅ＾ＣＤＫ９?Ｏ?Ｏ?？?Ｔａｔ：Ｐ－ＴＥＦｂ??，Ｔ，?Ｃｅｌｌｕｌａｒ?Ｉｆ?｜ｊ?▲?ＣｙｃＴＩ?ｉｆＳ｜ＣＤＫ９?ｃｏｍｐｌｅｘ??＾ｃＴ１?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?＋?ＣＤＫ９?Ｗ??＋?參??ＭｅＰＣＢ?ＬＡＲＰ７?ｗ??ＣｙｃＴ１?ＢＲＤ４：Ｐ－ＴＥＦｂ??７ＳＫｓｎＲＮＰ?＼?＾?＾?ｂｒ〇４ＣＤＫ９?ｃｏｍｐｌｅｘ??ｃｏｍｐｌｅｘ?ｎ??Ｐ－ＴＥＦｂ、ＣＤＫＳ??ＣｙｃＴ１??图１．１非活化型和
录（Ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）、整合（Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）、转录与翻译（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ａｎｄ??ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）、组装（Ａｓｓｅｍｂｌｙ）、出芽（Ｂｕｄｄｉｎｇ）和成熟（Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ）．等过程完??成复制周期及侵染（见图１．２）?首先ＨＩＶ－１利用表面糖蛋白ｇｐｌ２０与宿主淋??巴细胞表面上的受体ＣＤ４、ＣＣＲ５结合，导致病毒的包膜和细胞膜发生融合，释??放出病毒颗粒进入到宿主细胞中。接着病毒脱去核外壳和释放病毒基因组ＲＮＡ，??在逆转录酶的作用下，被逆转录成双链的ＤＮＡ并进入到细胞核中。随后经过整??合酶的催化，将其整合到宿主的染色体中，使其成为潜伏的病毒库，形成了?ＨＩＶ??无法治愈的极大障碍。在病毒的ＤＮＡ被整合进宿主的基因组中后，利用宿主细??胞中的ＲＮＡ聚合酶ＩＩ、细胞器等物质的功能产生病毒的ＲＮＡ并介导其出核和??翻译病毒蛋白，组装出成新的病毒颗粒体。然后，ＨＩＶ病毒再利用宿主细胞膜的??９??
发现的ＨＩＶ潜伏激活剂主要有组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Ｈｉｓｔｏｎｅ?ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．??ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，?ＨＤＡＣｉ）、蛋白激酶?Ｃ?（Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｋｉｎａｓｅ?Ｃ，ＰＫＣ）激活剂、甲基化抑制??剂、Ｐ－ＴＥＦｂ激活剂以及细胞因子免疫功能调节剂等（见图１．３）?＠，６９］。??１１??
【参考文献】
本文编号：2843198
【学位单位】：厦门大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R373
【部分图文】：
处于活化的状态，并且与作为通用转录因子的含溴结构域蛋白Ｂｒｄ４??（Ｂｒｏｍｏｄｏｍａｉｎｐｒｏｔｅｉｎ４）相结合，之后被Ｂｒｄ４上调转录活性，増强其对ＲＮＡ??聚合酶ＩＩ?ＣＴＤ的识别与结合（见图１．１）。Ｂｒｄ４是与ＣＤＫ９的第１７５位丝氨酸、??ＣｙｃｌｉｎＴｌ的４２６？５１６的氨基酸直接结合，募集Ｐ－ＴＥＦｂ到转录复合体中，从而调??节转录延伸［４７］。当敲低Ｂｒｄ４的表达量后，发现细胞内ＲＮＡ聚合酶ＩＩ?ＣＴＤ的第??二位丝氨酸磷酸化程度降低，以及７ＳＫｓｎＲＮＰ中结合的Ｐ－ＴＥＦｂ增加，而运用一??些外界的刺激因素处理细胞后，ＨＥＸＩＭ１、ＬＡＲＰ７等负性因子和Ｐ－ＴＥＦｂ从非活??性的７ＳＫｓｎＲＮＰ复合物中解离出来，同时使Ｐ－ＴＥＦｂ与Ｂｒｄ４的结合增加，刺激??转录的延伸［４８］。??ｔｅ＾ＣＤＫ９?Ｏ?Ｏ?？?Ｔａｔ：Ｐ－ＴＥＦｂ??，Ｔ，?Ｃｅｌｌｕｌａｒ?Ｉｆ?｜ｊ?▲?ＣｙｃＴＩ?ｉｆＳ｜ＣＤＫ９?ｃｏｍｐｌｅｘ??＾ｃＴ１?ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ?＋?ＣＤＫ９?Ｗ??＋?參??ＭｅＰＣＢ?ＬＡＲＰ７?ｗ??ＣｙｃＴ１?ＢＲＤ４：Ｐ－ＴＥＦｂ??７ＳＫｓｎＲＮＰ?＼?＾?＾?ｂｒ〇４ＣＤＫ９?ｃｏｍｐｌｅｘ??ｃｏｍｐｌｅｘ?ｎ??Ｐ－ＴＥＦｂ、ＣＤＫＳ??ＣｙｃＴ１??图１．１非活化型和
录（Ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ）、整合（Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）、转录与翻译（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ?ａｎｄ??ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）、组装（Ａｓｓｅｍｂｌｙ）、出芽（Ｂｕｄｄｉｎｇ）和成熟（Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ）．等过程完??成复制周期及侵染（见图１．２）?首先ＨＩＶ－１利用表面糖蛋白ｇｐｌ２０与宿主淋??巴细胞表面上的受体ＣＤ４、ＣＣＲ５结合，导致病毒的包膜和细胞膜发生融合，释??放出病毒颗粒进入到宿主细胞中。接着病毒脱去核外壳和释放病毒基因组ＲＮＡ，??在逆转录酶的作用下，被逆转录成双链的ＤＮＡ并进入到细胞核中。随后经过整??合酶的催化，将其整合到宿主的染色体中，使其成为潜伏的病毒库，形成了?ＨＩＶ??无法治愈的极大障碍。在病毒的ＤＮＡ被整合进宿主的基因组中后，利用宿主细??胞中的ＲＮＡ聚合酶ＩＩ、细胞器等物质的功能产生病毒的ＲＮＡ并介导其出核和??翻译病毒蛋白，组装出成新的病毒颗粒体。然后，ＨＩＶ病毒再利用宿主细胞膜的??９??
发现的ＨＩＶ潜伏激活剂主要有组蛋白去乙酰化酶抑制剂（Ｈｉｓｔｏｎｅ?ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅ．??ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，?ＨＤＡＣｉ）、蛋白激酶?Ｃ?（Ｐｒｏｔｅｉｎ?ｋｉｎａｓｅ?Ｃ，ＰＫＣ）激活剂、甲基化抑制??剂、Ｐ－ＴＥＦｂ激活剂以及细胞因子免疫功能调节剂等（见图１．３）?＠，６９］。??１１??
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 赵名;于晓妉;;辅助伴侣分子Cdc37蛋白的研究进展[J];生物技术通讯;2009年03期
本文编号：2843198
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/2843198.html
