抗苗勒管激素的单克隆抗体制备与鉴定

发布时间：2020-10-20 13:17

　　 目的表达高纯度的抗苗勒管激素蛋白,以该蛋白作为抗原制备单克隆抗体,并鉴定抗体亚型,为进一步开发优质的抗苗勒管激素诊断试剂盒做技术储备。方法在表达载体pET-28a(+)质粒中接入经密码子优化的抗苗勒管激素基因(AMH)片段,转化于BL21细菌中,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白大量表达,对上清中可溶性蛋白进行纯化。使用SDS-PAGE分析纯化蛋白的纯度。经纯化的抗原蛋白3次皮下免疫小鼠,挑选产生高效价的抗体的小鼠,取其脾细胞,制备悬液。经细胞杂交技术与骨髓瘤细胞进行融合,筛选能稳定持久分泌抗AMH抗体的杂交瘤细胞株,并制备腹水抗体。通过亲和层析技术、BCA蛋白检测方法等测定手段,纯化抗体、检测抗体浓度。结果筛选到2株能持久分泌抗AMH蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为克隆细胞株3F6和4E7,分泌抗体均为IgG1亚型。结论筛选出稳定分泌高纯度的抗苗勒管激素抗体的2株杂交瘤细胞,并制备单克隆抗体。下一步将其应用于AMH检测试剂盒的开发。
【部分图文】：

经过37℃诱导表达4 h和25℃诱导表达过液，菌体收集破碎，SDS-PAGE分析（图1）发现，AMH蛋白主要在包涵体中表达。37℃条件下，表达量更高且更省时，所以以37℃诱导表达4h，进行大量表达。经SDS-PAGE胶分析，NI-NTA亲和层析柱纯化后的AMH蛋白纯度达85%以上，蛋白分子量大约40 k左右。见图2。图2 SDS-PAGE分析AMH纯化蛋白

SDS-PAGE分析AMH纯化蛋白

抗体亚型鉴定
【参考文献】

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【二级参考文献】

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【相似文献】

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本文编号：2848729