DMSO联合神经营养因子BDNF诱导BMSCs向神经样细胞分化

发布时间：2020-10-24 07:36

　　 目的:探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)联合二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向神经样细胞分化的效果,初步检测miRNA-26a在神经细胞分化过程中的表达量变化。方法:从大鼠股骨抽取骨髓分离BMSCs,DMSO对其预诱导,随后用含BDNF的神经细胞培养基培养BMSCs,诱导其分化为神经细胞。免疫组化鉴定分化神经元样细胞特异标记物:神经元特异烯醇酶(neuron specific enolase,NSE)。实时定量PCR法检测神经分化前后酪氨酸磷酸酶蛋白(tyrosine phosphatase protein,PTEN)基因/mTOR和miRNA-26a的表达变化。结果:100 ng·mL-1 BDNF联合3%DMSO可诱导BMSCs向神经元样细胞分化,分化后神经细胞标志物NSE蛋白表达呈阳性,且神经分化过程中miRNA-26a、PTEN/mTOR的含量明显上调。结论:3%DMSO和100 ng·mL~(-1) BDNF的混合诱导剂可诱导大鼠BMSCs向神经元样细胞分化,而miRNA-26a可能通过PTEN/mTOR调节神经分化。
【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 试剂
        1.1.3 仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 BMSCs的获取及纯度检测
        1.2.2 BDNF/DMSO联合诱导BMSCs的分化
        1.2.3 BMSCs神经分化的鉴定
            1.2.3. 1 形态鉴定
            1.2.3. 2 免疫组化检测各组神经元特异性烯醇酶（neuron specific enolase,NSE）蛋白的表达
        1.2.4 实时荧光定量PCR检测miRNA-26a、PTEN、mTOR的表达变化
2 结果
    2.1 诱导前后大鼠BMSCs细胞的形态变化
    2.2 免疫细胞组化对BMSCs分化的鉴定
    2.3 实时荧光定量PCR对诱导前后miRNA-26a、PTEN、mTOR表达量的检测
3 讨论

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本文编号：2854193