粪肠球菌胶原黏附素ace基因对生物被膜形成的影响

发布时间：2020-10-26 09:08

　　 目的探讨粪肠球菌ace基因在细菌生物被膜形成中的作用。方法将粪肠球菌野生株U8-ace~-、空质粒对照株EU8-ace~-、转化株ZU8-ace~+接种至96孔细胞板,分别于37℃及46℃培养6 h,测定OD_(595),比较粪肠球菌ace基因阳性、阴性菌株在不同温度下的早期黏附能力;将U8-ace~-,EU8-ace~-,ZU8-ace~+接种到96孔板,46℃培养3,6,12,24,36及48 h,结晶紫染色,测定OD_(570)微量滴定板法比较粪肠球菌ace基因野生株、空质粒对照株、转化株的生物被膜形成能力;将U8-ace~-,EU8-ace~-,ZU8-ace~+在含盖玻片的细胞培养皿内4 6℃培养6～72 h,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察比较ace~+,ace~-肠球菌生物被膜的平均厚度、密度、活菌比例。结果转化株ZU8-ace~+于46℃培养的早期黏附OD_(595)值高于37℃培养的OD_(595)值,差别有统计学意义(P0.01)。粪肠球菌U8-ace~-,EU8-ace~-37℃培养的早期黏附OD_(595)与46℃培养的值比较,差别无统计学意义(P0.05);微量滴定板法显示不同时间点ace基因转化株的OD_(570)值均大于野生株的OD_(570)值;转化株与野生株生物被膜形成能力OD_(570)比较,差别有统计学意义(P0.01);空质粒对照株与野生株比较,差别无统计学意义(P0.05);CLSM观察不同培养时间点生物被膜的平均厚度、细菌的密度以及活菌比例,ace~+粪肠球菌的值均高于ace~-粪肠球菌,ZU8-ace~+与U8-ace~-比较,差别有统计学意义(P0.01);EU8-ace~-与U8～ace~-比较,差别无统计学意义(P0.05)。结论粪肠球菌胶原黏附素ace基因或有利于肠球菌生物被膜的形成。
【部分图文】：

微量滴定板法比较肠球菌野生株U8-ace-、空质粒对照株EU8-ace-、转化株ZU8-ace+生物被膜形成能力，各菌株的生物被膜形成能力随培养时间延长而提高，粪肠球菌转化株ZU8-ace+在各时段的生物膜形成能力均比野生株U8-ace-、空质粒对照株EU8-ace-的强。经单因素方差分析，ZU8-ace+与U8-ace-比较，差别有统计学意义（P<0.01);EU8-ace-与U8-ace-比较，差别无统计学意义（P>0.05，图1）。2.3 CLSM观测比较粪肠球菌ace基因阳性、阴性菌株生物被膜情况

在生物被膜形成各阶段，粪肠球菌转化株ZU8-ace+所形成生物膜的平均厚度均高于野生株U8-ace-，经单因素方差分析，ZU8-ace+与U8-ace-比较，差别有统计学意义（P<0.01);EU8-ace-与U8-ace-比较，差别无统计学意义（P>0.05，图2）。2.3.2 ace+,ace-粪肠球菌生物被膜中层内细菌密度比较

生物膜内层、中间层的细菌密度相对较大，而外层较低。取生物膜中层进行粪肠球菌转化株ZU8-ace+与野生株U8-ace-生物被膜密度比较，结果表明，粪肠球菌转化株ZU8-ace+所形成的生物被膜密度比野生株U8-ace-的高，经单因素方差分析，ZU8-ace+与U8-ace-比较，差别有统计学意义（P<0.01);EU8-ace-与U8-ace-比较，差别无统计学意义（P>0.05，图3）。2.3.3 ace+,ace-粪肠球菌生物被膜内活菌比例比较
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