小鼠静脉内皮细胞中KLF15下游炎症相关基因的筛选及对DVT形成影响的实验研究

发布时间：2020-10-26 22:33

　　深静脉血栓在临床上尤其是骨科发病率高,早期诊断较为困难,治疗难度大,并发肺栓塞后死亡率高。本课题组前期建立小鼠动物模型,发现内皮细胞活化、凝血/抗凝系统失衡及炎症反应与DVT形成之间关系密切。结合经典文献关于DVT的研究,本课题就锌指样转录因子15(KLF15)及其下游调控基因在DVT形成中的作用及其调控关系从动物实验方面进行研究。探讨KLF15下游调控基因在下腔静脉狭窄法DVT小鼠静脉壁组中的表达变化和其作用作一初步研究。[目的]建立C57小鼠下腔静脉狭窄法DVT模型,造模后24小时获取小鼠下腔静脉壁组织,观察造模小鼠建模后血栓形成情况并检测静脉壁组织中KLF15,通过RNA-seq技术在全基因组范围内分析其差异性基因,探讨其与DVT形成的关系;[方法]1.60只C57小鼠分为正常组20只、DVT组20只、KLF15抑制组20只,正常组与DVT组于造模前24小时尾静脉注射生理盐水0.2ml,KLF15抑制组于造模前24小时尾静脉注射KLF15 siRNA 100nmol/只,DVT组采用下腔静脉狭窄法造模,造模24小时后获取下腔静脉组织;real-time PCR法检测静脉组织中KLF15的表达;观察血栓形成情况。2.运用RNA-seq技术,在全基因组范围内分析空白对照组与DVT组,DVT组与KLF15干扰组下游差异性基因表达结果,研究KLF15与下游基因的调控关系。[结果]1.DVT组成栓率73%、死亡率15%、血栓湿重6.65±2.37mg;KLF15抑制组成栓率88%,死亡率10%,血栓湿重15.85±2.64mg;real-time PCR检测DVT组、KLF15干扰组小鼠静脉组织中KLF15表达发现,抑制KLF15的表达后KLF15抑制组与DVT组相比表达下调(P0.05)。2.空白对照组与DVT组、DVT组与KLF15抑制组RNA-seq测序,在空白对照组与DVT组对比组中,共筛选出差异性基因15978个(P0.05),进一步筛选出具有显著性差异基因701个(丨log2(foldchange)丨1)。其中表达上调的差异性基因497个,表达下调的差异性基因204个。在DVT组与KLF15抑制组对比中,共筛选出差异性基因218个,进一步筛选出具有显著性差异基因88个(丨log2(foldchange)丨1)。其中表达上调的差异性基因20个,表达下调的差异性基因68个,筛选出炎性相关差异基因17个,其中Strip2、Cd51、A2m、Ankrd1等可能通过影响IL-1 β、IL-6、TNF-a、TGF-β 1的表达而影响深静脉血栓的形成。[结论]1.KLF15可抑制深静脉血栓的形成;2.KLF15可能调控下游基因Strip2、CD51、A2m、Ankrd1等影响深静脉血栓的形成;
【学位单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R-332;R68
【部分图文】：

小动物,麻醉机