过表达SOCS1的DCs过继免疫烟雾致小鼠COPD模型BALF中Th17、Treg相关细胞因子的变化及意义

发布时间：2020-10-30 12:24

　　 目的:通过回输过表达细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)的DCs到小鼠体内,并观察小鼠慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型支气管肺泡灌洗液(BALF)中辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)相关细胞因子的变化,进一步探讨COPD的发病机制,为COPD寻找治疗靶点。方法:体外培养DCs并鉴定其表型、形态。构建SOCS1过表达慢病毒,转染培养第5天未成熟DCs(imDCs)获得SOCS1过表达DCs,使用蛋白印迹法(Western blot)检测SOCS1在DCs内的表达情况,并将转染的细胞以尾静脉注射法回输到小鼠体内;42只C57BL/6小鼠随机分成7个组,每组6只,分别是生理盐水(NS)、im DC 1×10~6、DC-SOCS11×10~6、DC-SOCS1 2×10~6烟熏造模第1天回输组、imDC 1×10~6、DC-SOCS1 1×10~6、DC-SOCS1 2×10~6烟熏造模第7天回输组。使用烟熏法建立COPD小鼠模型至实验第4周(28天)最后一次烟熏完后处死七组小鼠,并收集小鼠BALF。收集的BALF予以离心取上清液用于酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测Th17、Treg相关细胞因子的变化。结果:1、体外培养小鼠骨髓源性DCs,流式细胞术检测第7天脂多糖(LPS)诱导后DCs细胞有较高的CD80、CD83表达;应用扫描电镜观察第7天LPS诱导后DCs表面有明显众多的褶皱和树枝样突起。2、使用Western blot检测阳性转染组SOCS1的表达高于阴性转染组及空白组,差异有统计学意义(P0.01)。3、第1天、第7天imDC 1×10~6、DC-SOCS1 1×10~6及DC-SOCS1 2×10~6回输组与第1天NS回输组相比,小鼠COPD模型BALF中白介素-17(IL-17)、IL-23含量降低,差异有统计学意义(P0.01);第1天、第7天DC-SOCS1 1×10~6、DC-SOCS1 2×10~6回输组分别与imDC 1×10~6回输组比较BALF中IL-17、IL-23含量降低,差异有统计学意义(P0.01);DC-SOCS1 2×10~6回输组与DC-SOCS1 1×10~6回输组相比,BALF中IL-17、IL-23含量降低,差异有统计学意义(P0.01);DC-SOCS11×10~6第7天回输组小鼠BALF中IL-17的含量较第1天回输组增高,但差异无统计学意义(P0.05),IL-23含量增高差异有统计学意义(P0.01);DC-SOCS12×10~6烟熏第7天回输组小鼠BALF中IL-17、IL-23的含量较第1天回输组增高,差异有统计学意义(P0.01)。4、第1天、第7天imDC 1×10~6、DC-SOCS1 1×10~6及DC-SOCS1 2×10~6回输组与第1天NS回输组相比,BALF中IL-10、转换生长因子-β(TGF-β)含量增高,差异有统计学意义(P0.01);第1天、第7天DC-SOCS1 2×10~6回输组与DC-SOCS11×10~6回输组相比,BALF中IL-10、TGF-β含量增高,差异有统计学意义(P0.01);DC-SOCS1 1×10~6第7天回输组小鼠BALF中IL-10、TGF-β的含量较第1天回输组减少,差异有统计学意义(分别为P0.05、P0.01),DC-SOCS1 2×10~6烟熏第7天回输组小鼠BALF中IL-10、TGF-β的含量较第1天回输组减少,差异有统计学意义(P0.01)。结论:1、im DCs回输小鼠体内可抑制COPD中Th17相关细胞因子分泌。2、SOCS1过表达的DCs回输小鼠体内后可抑制COPD中以Th17为主的免疫反应,效果优于单纯回输imDCs,且与浓度、时间有关,提示合适浓度、提前干预可能更早抑制COPD中以Th17为主的免疫反应,为COPD治疗提供新的靶点。
【学位单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R563.9;R-332
【部分图文】：

内容颈椎脱臼法处死后立即用 75%乙醇浸泡，移入超净工作台面的泡沫板上，分离出小鼠股骨和胫骨，剔用 1mL 无菌注射器吸 PBS 冲洗骨髓直至骨髓腔变白，弃上清。用 PBS 重悬细胞沉淀。缓慢将细胞悬液 15mL 离心管内，保持细胞悬液在淋巴细胞分离液上心 20min，离心后溶液分 5 层，吸取中间骨髓基质血清及青链霉素的 DC 细胞生长培养基以 106/mL 细小鼠 GM-CSF(25ng/mL) 和 IL-4(25ng/mL)进行诱养。每天观察细胞生长状态，培养第 7 天加入 LPS

图 2 pLVX-IRES-ZsGreen1 载体图谱信息I 对 pLVX-IRES-ZsGreen1 载体进行酶试剂盒回收 pLVX-IRES-ZsGreen 载F 序列合成5μl 2μg1μl1μlup to 50μl

3 EcoRI 和 BamHI 双酶切鉴定图ne 2:1# Plasmid Digested with EcoRI/Ba大量抽提的菌液送测序，并将剩余的（见图 4），正确无误后，用得到足够多的重组质粒进行
【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 ;Dendritic Cells Transduced with SOCS1 Gene Exhibit Regulatory DC Properties and Prolong Allograft Survival[J];Cellular & Molecular Immunology;2009年02期

本文编号：2862472