丁酸梭菌脂磷壁酸的分离及其对NR8383细胞炎症反应的影响研究

发布时间：2020-10-30 21:32

　　 革兰氏阳性菌脂磷壁酸在细胞的黏附、定植及免疫调节中发挥重要作用。目前,丁酸梭菌脂磷壁酸(Clostidium butyricum lipoteichoic acid,bLTA)对宿主细胞的免疫调节机制尚不明确,本文通过研究致病菌金黄色葡萄球菌的脂磷壁酸(Staphylococcus aureus lipoteichoic acid,aLTA)及 bLTA 对 NR8383 细胞炎症反应的影响,为揭示bLTA对NR8383细胞的免疫调节机制提供进一步理论依据。本研究利用FTIR和NMR对aLTA及bLTA进行结构解析,发现二者主链上均含甘油单体,侧链上的羟基均由N-乙酰葡萄糖胺及丙氨酸修饰,其中aLTA含有更多甘油单体,N-乙酰葡萄糖胺及丙氨酸修饰。CCK-8及CellTiter-Lumi等实验表明,aLTA及bLTA均能抑制NR8383细胞增殖,但bLTA对生长增殖的影响较小。细胞凋亡分析表明,与aLTA处理组相比,20、40、60、80μg/mL的bLTA处理组,细胞凋亡率分别下降19.07%、15.13%、11.57%和14.46%。转录组测序及RNA干扰研究发现,TLR2是aLTA、bLTA识别结合的细胞膜受体。Q-PCR分析结果表明,bLTA处理组的IL-1β和TNF-α转录水平远小于aLTA处理组。Western Blotting研究也表明,bLTA刺激细胞产生的炎症效应弱于aLTA处理组,这提示bLTA对NR8383细胞的炎症刺激作用明显较弱。敲减TLR2后,aLTA及bLTA刺激细胞产生炎症因子的能力均得到下调。这表明,LTA对NR8383的炎症刺激作用可能与其结构有关;bLTA的刺激作用明显弱于aLTA;TLR2是bLTA识别与结合NR8383细胞的膜受体蛋白,该受体受到bLTA刺激后,细胞NF-κB信号通路被激活,p65蛋白被磷酸化并入核,启动IL-1β、TNF-α等的转录,产生并分泌低水平的炎症因子,刺激NR8383细胞的免疫活性。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R392
【部分图文】：

图２．１?ａＬＴＡ、ｂＬＴＡ红外谱图??Ｆｉｇ．２．１?ａＬＴＡ?ａｎｄ?ｂＬＴＡ?ｉｎｆｒａｒｅｄ?ｓｐｅｃｔｒｏｇｒａｍ??表２．３?ａＬＴＡ、ｂＬＴＡ结构上的基团??Ｔａｂｌｅ?２．３?ａＬＴＡ?ａｎｄ?ｂＬＴＡ?ｓｔｒｕｃｕｒａｌ?ｇｒｏｕｐ??ａＬＴＡ?ｂＬＴＡ??３４２７．００?３４１６．４１?＾ＮＨ??２９３５．８７?２９２３．１７?－ＣＨ２．?－ＣＨ３??１６４５．３０?１６３８．１０?＿Ｃ＝〇??１５４１．２０?１５４１．５９?－Ｃ＝Ｈ??１３９６．８３?１３７７．７８?－Ｐ＝〇??１０７１．７５?１０４１．２７?－￡－〇???ｌｌ??

Ｆｉｇ．２．２?Ｈ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｍａｇｎｅｔｉｃ?ｒｅｓｏｎａｎｃｅ?ｏｆ?ａＬＴＡ?ａｎｄ?ｂＬＴＡ??２．５本章小结??红外图谱表明ａＬＴＡ和ｂＬＴＡ所含的基团一致，提示提纯的产物为丁酸梭菌??脂磷壁酸。核磁氢谱进一步分析表明ａＬＴＡ含更多的甘油单体、Ｎ－乙酰葡萄糖胺??及丙氨酸修饰，结构上的不同可能是二者功能不同的原因之一。??

?２４?ｈ??图３．２?ＬＰＳ对细胞迁移能力的影响??Ｆｉｇ．３．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ＬＰＳ?ｏｎ?ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｍｉｇｒａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｉｅ
【参考文献】

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本文编号：2863023