小鼠窦前卵泡与卵泡膜间质细胞的三种共培养方法比较

发布时间：2020-11-05 22:54

　　 目的 比较小鼠窦前卵泡与卵泡膜间质细胞体外共培养的三种模型,通过对卵泡的形态观察、生长发育、存活率、激素分泌和减数分裂恢复能力方面进行评价,探索一种有效、经济、简便的培养系统用于对卵泡和卵泡膜间质细胞间相互作用的相关研究。方法 选用21-25日龄C57BL/6/、鼠的卵泡膜间质细胞与14-16日龄C57BL/6小鼠的窦前卵泡(直径范围110-140μm),分别采用海藻酸钠凝胶法、Transwell间接接触法和Transwell直接接触法进行共培养,在a-MEM培养基(含有10%FBS、 ITS、10mIU/mLFSH、100IU/ml青霉素、O.lmg/ml链霉素)中体外共培养6天,每2天半量换液,监测并比较各组卵泡形态、生长发育、激素分泌(睾酮、雌二醇)、存活率,6天后进行体外成熟统计各组卵母细胞成熟阶段。结果 在本实验条件下,在海藻酸钠凝胶中培养的卵泡能够始终维持其三维结构,而Transwell中培养的卵泡在培养至第5天时较三维培养的卵泡生长快,但对于卵泡的观察和完整结构的维持上不如海藻酸钠凝胶法,相应的雌二醇分泌水平也与卵泡的生长模式相一致。卵泡的存活率在培养至第5天时出现差异,海藻酸钠凝胶法(77.3%)和Transwell直接接触法(76.5%)要明显高于Transwell间接接触法(57.4%)(P0.05)。至于卵母细胞的减数分裂恢复情况,三种共培养方法之间均无统计学差异。 结论 通过对卵泡的形态观察、生长发育、激素分泌和减数分裂恢复能力等方面的评价,三种共培养方法间无明显差异。海藻酸钠凝胶法具备便于观察、维持卵泡三维结构、经济等优点,但卵泡的包埋和释放过程较为繁琐,且增加对卵泡造成损伤的机会,对卵泡的生长也有一定限制。同时,Transwell直接接触法具有操作简便的优点,与海藻酸钠凝胶法相比有相似的卵泡存活率和卵母细胞成熟率,但相应的成本较高,而且对卵泡的观察不够清晰。因此,可根据各自实验室的条件以及实验目的和实验设计选择适宜的共培养方法,如短期(5天内)的体外培养可以选择Transwell间接接触法,而更长时间的培养则推荐海藻酸钠凝胶法。
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2014
【中图分类】：R329.2
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
材料和方法
结果
讨论
总结
参考文献
综述
    参考文献
致谢

【参考文献】

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1 ;Current understanding of ovarian aging[J];Science China(Life Sciences);2012年08期

本文编号：2872305