皮肤异种移植及基因导入模型的建立

发布时间：2020-11-07 07:47

　　 目的:在研究皮肤疾病如银屑病、皮肤肿瘤、伤口愈合及皮肤遗传病时,常通过构建小鼠疾病模型,如银屑病小鼠、小鼠鳞癌模型等进行研究。然而小鼠和人之间遗传背景差别较大,这些模型并不能很好地代表皮肤疾病的发生、发展等过程。本研究探讨如何构建较成功的人皮肤异种移植及基因导入的小鼠模型,以期为人类皮肤疾病如皮肤肿瘤、伤口愈合、皮肤遗传病等提供人源化的小鼠研究模型。方法:1收集的新生小黑鼠的皮肤将其依次浸没于10%的消毒水,75%的乙醇及无菌的生理盐水中进行处理,用眼科剪和组织镊进行修剪呈约大小为1-1.5cm(尽量去掉脂肪),使真皮侧平铺并紧贴于培养皿盖内侧,腹腔注射浓度为4ul/g的水合氯醛麻醉裸鼠,用眼科剪在小鼠两侧腰部制造全层皮肤缺损创面约为1.5㎝×1㎝大小的伤口(即移植床),将新生小鼠的皮肤移于移植床中,并用绷带包扎,约第14天后将开绷带。2若裸鼠移植同种异基因移植的皮肤存活较好,说明该模型构建成功,则把人的包皮依次浸没于10%的消毒水,75%的乙醇及无菌的生理盐水中进行处理,用眼科剪和组织镊进行修剪呈约大小为1-1.5cm(尽量去掉脂肪),使真皮侧平铺并紧贴于培养皿盖内侧,腹腔注射浓度为4ul/g的水合氯醛麻醉裸鼠及NOD-scid小鼠,用眼科剪在小鼠两侧腰部制造全层皮肤缺损创面约为1.5㎝×1㎝大小的伤口(即移植床),将新生小鼠的皮肤移于移植床中,并用绷带包扎,约第14天后将开绷带。3若人的包皮存活较成功,大约第3周时通过皮内注射带有报告蛋白(GFP)的病毒的方式,建立人皮肤异种移植及基因导入模型。结果:2周后可观察到1移植于裸鼠腰部的新生黑鼠的皮肤存活较好,毛发稠密,部分区域可见色素脱失见,该结果表明同种异基因模型构建较成功,为构建人皮肤异种移植小鼠模型提供了有力的依据。2移植于裸鼠的人的包皮存活较差,呈暗红色,可见收缩及脱落现象3移植于裸鼠的包皮在NOD-scid小鼠腰部可以看到皮片成活较好,具有正常的皮肤组织结构,并在移植的包皮中检测到报告蛋白(GFP)。结论:移植于裸鼠和NOD-scid小鼠后的人皮肤都保留了正常的组织结构,而移植于NOD-scid小鼠的皮瓣存活更好,并能够感染上带有报告蛋白的病毒,这为皮肤肿瘤、伤口愈合、皮肤遗传病等提供了较好的研究模型。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R-332;R622.1
【部分图文】：

17图 7 移植后第 4 周可见人的皮肤成功移植到 NOD-scid 小鼠上，并成功感染上病毒（红光代表的时 involcrin，它是一种由人角质细胞合成的蛋白，对角质细胞具有保护作用，分布在细胞质，可通过谷氨酰胺酶的作用，分泌到细胞外。）

图 3 图 4 4X10图 3 移植后第 3 周，皮肤存活尚可，呈暗红色，部分区域可见收缩及脱落现象图 4 移植后第 3 周，图片左侧棘层较薄，真皮内见大量毛囊结构，交界处表皮完好，未见坏死，右侧棘层较厚，真皮未见毛囊结构3 皮肤异种移植的 NOD-scid 小鼠模型的构建移植后第 3 周可见移植于 NOD-scid 小鼠的人的包皮存活较好，色泽鲜艳，未见明显收缩及脱落现象（如图 5）。病理结果可见视野左侧棘层较厚，真皮未见毛囊结构，交界处表皮完好，未见坏死，图片右侧棘层较薄，真皮内见大量毛囊结构（如图 6）。
【参考文献】

相关期刊论文 前2条

1 丛文铭;;肝移植术后抗体介导性排异的病理诊断[J];实用器官移植电子杂志;2014年02期

2 李振宇,徐开林,潘秀英,鹿群先,何徐彭,孙海英,主鸿鹄;HIV-1慢病毒载体的构建及结构改造[J];中华血液学杂志;2004年09期

本文编号：2873654