耐药肺炎克雷伯菌噬菌体JD902的分离及生物学特性和安全性研究

发布时间：2020-11-08 19:08

　　 目的·筛选耐药肺炎克雷伯菌的噬菌体,并检验其是否符合耐药肺炎克雷伯菌噬菌体库的入库要求。方法·将分离自1例泌尿系统感染患者的1株耐药肺炎克雷伯菌作为宿主菌,从环境污水中进行噬菌体筛选,分离、纯化噬菌体并进行生物学特性的研究及噬菌体基因组测序,并基于全基因组数据分析其使用安全性。结果·分离到1株耐药肺炎克雷伯菌噬菌体,将其命名为JD902,属有尾目,裂解量为88 pfu/cell,在pH值4.0～11.0范围内都能保持较好的活性。基因组分析表明,其不携带抗生素抗性基因和毒力因子基因。结论·JD902为1株烈性噬菌体,体外稳定性及安全性均较高,可以纳入临床治疗使用噬菌体库。
【部分图文】：

使用透射电镜观察噬菌体JD902形态，其由多面体对称的头部组成，属于有尾目噬菌体，其头部直径约为82 nm（图1）。2.2 噬菌体JD902的生物学特性

分别按MOI=10、1、0.1、0.01、0.001混合噬菌体和宿主菌，检测共培养后的噬菌体效价；实验结果发现，其最佳MOI为0.001～0.01（图2）。2.2.2噬菌体JD902的体外杀菌活性

以横坐标表示噬菌体和宿主细菌作用时间，以纵坐标表示未被宿主菌吸附的噬菌体的百分率绘制噬菌体的吸附曲线。以横坐标表示噬菌体和宿主菌共同作用的时间，纵坐标表示培养混合物中噬菌体的效价，绘制噬菌体一步生长曲线。根据吸附曲线的结果，该噬菌体与宿主菌共同孵育6 min后，约93.2%的噬菌体可吸附于宿主菌上。从噬菌体的一步生长曲线来看，其潜伏期约为10 min，裂解期约为50 min，随后进入稳定期，噬菌体JD902的溶菌周期约60 min（图4）。根据噬菌体裂解量计算公式：噬菌体裂解量=稳定期噬菌体效价/感染初期宿主菌数量，该噬菌体裂解量约为88 pfu/cell，即平均每个宿主菌裂解释放约88个子代噬菌体。图4 噬菌体JD902的吸附曲线（A）和一步生长曲线（B)
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本文编号：2875208