全合成噬菌体展示抗体库淘筛策略与多样性分析

发布时间：2020-11-11 22:55

　　 大容量全合成噬菌体展示抗体库可用于针对特异靶点生产高亲和力抗体,是重要的单克隆抗体来源,其中亲和淘筛策略是影响抗体筛选效果的关键。亲和淘筛中的多样性损失会降低高亲和力抗体获得概率,为探究亲和淘筛多样性损失最小的筛选策略,分别以PCSK9,CD20为靶点,用全合成噬菌体展示抗体库淘筛,通过滴度测定与测序分析比较首轮淘筛中酸洗脱与宿主菌直接感染所得洗脱物的框架与多样性差异。同时采取直接液体扩增、刮板后液体扩增,以及30、37℃两种扩增温度探究不同扩增条件对次级库框架分布的影响。最佳淘筛方法效果通过PCSK9,CD20多轮淘筛后的单克隆phage-Elisa结果验证。研究结果表明合并酸洗脱与宿主菌洗脱噬菌体,30℃直接液体扩增可以使合成库首轮淘筛多样性损失最低,采用此法获得了靶向PCSK9与CD20的阳性序列。最终开发了一种保留全合成噬菌体抗体库多样性效果好、实验周期短的淘筛方法。可供全合成噬菌体抗体库进行高效的抗体筛选,有效推进了抗体药物早期发现进程。
【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 主要试剂与仪器
        1.1.2 菌株与抗体库
    1.2 方法
        1.2.1 辅助噬菌体储液与噬菌体抗体库制备
        1.2.2 亲和淘筛
        1.2.3滴度测定与测序分析
        1.2.4 制备PCSK9次级库
        1.2.5 anti-PCSK9 sc Fv与anti-CD20 sc Fv的亲和淘筛与初步鉴定
        1.2.6 单克隆phage-Elisa
2 结果
    2.1 噬菌体文库的制备与鉴定
    2.2 洗脱方式对淘筛效果的影响
    2.3 制备方式对次级库质量的影响
    2.4 合成抗体库最佳淘筛方法验证
3 讨论

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本文编号：2879869