吴茱萸碱联合吉西他滨对人舌鳞癌荷瘤裸鼠模型的抑制作用及其机制研究
发布时间：2020-11-12 23:07
背景和目的:传统手术及放化疗等治疗手段对舌癌患者带来的致残性和全身毒副反应等尚不能达到理想的治疗效果。本实验的目的在于研究中药吴茱萸碱联合西药吉西他滨对舌鳞癌裸鼠移植瘤生长的影响,初步探讨两药联合作用的机制,并分析用药的安全性。方法:通过皮下接种Cal-27肿瘤细胞建立人舌鳞癌荷瘤裸鼠模型。建模成功后采用灌胃及腹腔注射法给予吴茱萸碱、吉西他滨单独及联合对荷瘤裸鼠进行药物干预。观察中药吴茱萸碱联合西药吉西他滨对Cal-27舌鳞癌荷瘤裸鼠一般状态的影响;监测裸鼠体质量、瘤体体积、进食量、进水量,及对外界刺激的应激反应变化;称量瘤体重量并计算抑瘤率;HE染色法观察移植瘤组织中肿瘤细胞形态变化;肉眼观察裸鼠心、肝、肺、脾、肾脏组织的肿瘤转移情况;HE染色法观察各脏器形态变化;透射电镜下观察移植瘤组织中肿瘤细胞超微结构改变;Western blot定量分析移植瘤组织中NF-κB/p65、Ik-βα、Bax、Bcl-2以及Bcl-xl的蛋白表达,并计算Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax比值;免疫组化法定性分析移植瘤组织中NF-κB/p65、Ik-βα、Bax以及Bcl-2的蛋白表达。结果:联合组的瘤体生长速度显著慢于模型对照组、吴茱萸碱组、吉西他滨组。联合组瘤体质量明显比模型对照组、吴茱萸碱组、吉西他滨组要小。四组中各脏器未发现可疑转移灶。联合组病理性核分裂像的数目明显少于模型对照组、吴茱萸碱组及吉西他滨组。模型对照组肿瘤细胞体积大,核膜清晰、完整,呈现恶性肿瘤特征,药物干预组的肿瘤细胞体积减小,染色质发生凝集、边聚,出现凋亡形态改变,联合组凋亡表现尤为典型。联合给药组较模型对照组及单药组其裸鼠进食量、进水量及应激反应下降要慢。各组裸小鼠的心、肝、肺、脾、肾组织结构清晰,未见明显病理性改变。药物干预组都可不同程度的降低Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达,表现为Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax的比值减小,其中联合组凋亡率减小最为显著。与模型对照组相比,吴茱萸碱组和联合组均能显著抑制NF-κB/p65的表达,促进Ik-βα的表达。结论:吴茱萸碱及吉西他滨均具有抗舌鳞状细胞癌生长作用,联合应用时具有协同抑制作用,其作用机制可能是吴茱萸碱通过抑制舌鳞癌组织中NF-κB信号通路的激活、抑制Bcl-2/Bcl-xl的表达,促进Bax的表达,从而降低Bcl-2/Bax、Bcl-xl/Bax比值,最终增强吉西他滨对舌鳞癌的促凋亡作用。此外,在实验期间,两者联合用药未对实验动物产生明显的毒副作用,说明用药方法及剂量均在安全范围内。
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.86;R-332
【部分图文】：
一种新型药物-缩合-双环4,6-取代的1,2,4-三唑并-1,3,4-噻二唑衍生物（CBTT）可以阻断（通过时间依赖性方式）TNFα诱导的上游IκBα激酶的磷酸化，最终抑制NF-κB信号通路的活化和核易位。1.5 选题依据与思路我们课题组的前期体内外实验研究已经证实Evo联合放射线能够抑制舌鳞癌细胞（Tca-8113）及荷瘤裸鼠移植瘤的生长[57,58]。为求进一步了解Evo联合治疗的作用疗效，本研究首次将中药Evo联合西药Gem对人舌鳞癌裸鼠皮下移植瘤进行药物干预，观察中药Evo联合西药Gem对荷瘤裸鼠移植瘤生长的影响，并探讨联合治疗可能的作用机制，为Evo联合化疗药物在生物医学领域中的应用提供理论基础，为TSCC的防治提供新的思路。1.6 技术路线
魉?醵匀松嗔郯┖闪雎闶竽Ｐ偷囊种谱饔眉捌浠?蒲芯?14实验分组、药物干预过程、给药浓度、剂量、方式及频次见表2-5、图2-1、图2-2。腹腔注射（图2-2A）方法为：首先用1 mL注射器吸取适量生理盐水或吉西他滨溶液，排去气泡，用左手拇指及食指固定小鼠头部，小指固定尾部，腹部向上，使其头呈低位，尾高位，用碘伏棉球擦拭消毒注射区域，右手持注射器于腹白线稍右侧以15°刺入皮下，并进针约0.5 cm，再将注射器摆至与皮肤呈45°角，穿透腹壁（可感知明显落空感），回抽针栓无腹腔内容物后注射药物。灌胃给药（图2-2B）方法为：12号灌胃针头配合1 mL注射器吸管吸取适量吴茱萸碱溶液，排去气泡，用左手拇指及食指固定小鼠头部，小指固定尾部，腹部向上
2.6 药物干预期间观察指标2.6.1 裸鼠一般状态如图2-3，轻抓鼠尾，将动物从笼中取出置于笼具上，观察实验动物外观、行动、精神状态、排便、排尿、死亡等情况。图 2-3 裸鼠一般状态观察。2.6.2 肿瘤体积肿瘤体积（Volume）通过电子游标卡尺测定。每3天测量一次移植瘤的最长径及最短径，由公式1进行计算，并绘制肿瘤体积变化曲线。肿瘤体积(V) cm3=[1 -（（长径×短径2）×100%] （1）22.6.3 动物体重用电子天平每3天测量一次裸鼠体质量，并绘制体重变化曲线。
【参考文献】
本文编号：2881356
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.86;R-332
【部分图文】：
一种新型药物-缩合-双环4,6-取代的1,2,4-三唑并-1,3,4-噻二唑衍生物（CBTT）可以阻断（通过时间依赖性方式）TNFα诱导的上游IκBα激酶的磷酸化，最终抑制NF-κB信号通路的活化和核易位。1.5 选题依据与思路我们课题组的前期体内外实验研究已经证实Evo联合放射线能够抑制舌鳞癌细胞（Tca-8113）及荷瘤裸鼠移植瘤的生长[57,58]。为求进一步了解Evo联合治疗的作用疗效，本研究首次将中药Evo联合西药Gem对人舌鳞癌裸鼠皮下移植瘤进行药物干预，观察中药Evo联合西药Gem对荷瘤裸鼠移植瘤生长的影响，并探讨联合治疗可能的作用机制，为Evo联合化疗药物在生物医学领域中的应用提供理论基础，为TSCC的防治提供新的思路。1.6 技术路线
魉?醵匀松嗔郯┖闪雎闶竽Ｐ偷囊种谱饔眉捌浠?蒲芯?14实验分组、药物干预过程、给药浓度、剂量、方式及频次见表2-5、图2-1、图2-2。腹腔注射（图2-2A）方法为：首先用1 mL注射器吸取适量生理盐水或吉西他滨溶液，排去气泡，用左手拇指及食指固定小鼠头部，小指固定尾部，腹部向上，使其头呈低位，尾高位，用碘伏棉球擦拭消毒注射区域，右手持注射器于腹白线稍右侧以15°刺入皮下，并进针约0.5 cm，再将注射器摆至与皮肤呈45°角，穿透腹壁（可感知明显落空感），回抽针栓无腹腔内容物后注射药物。灌胃给药（图2-2B）方法为：12号灌胃针头配合1 mL注射器吸管吸取适量吴茱萸碱溶液，排去气泡，用左手拇指及食指固定小鼠头部，小指固定尾部，腹部向上
2.6 药物干预期间观察指标2.6.1 裸鼠一般状态如图2-3，轻抓鼠尾，将动物从笼中取出置于笼具上，观察实验动物外观、行动、精神状态、排便、排尿、死亡等情况。图 2-3 裸鼠一般状态观察。2.6.2 肿瘤体积肿瘤体积（Volume）通过电子游标卡尺测定。每3天测量一次移植瘤的最长径及最短径，由公式1进行计算，并绘制肿瘤体积变化曲线。肿瘤体积(V) cm3=[1 -（（长径×短径2）×100%] （1）22.6.3 动物体重用电子天平每3天测量一次裸鼠体质量，并绘制体重变化曲线。
【参考文献】
相关期刊论文 前5条
1 李洁;张凯亮;胡成琦;汉媛媛;康正强;孙芹芹;王静;;吴茱萸碱联合放射治疗对舌鳞癌细胞Tca-8113裸鼠移植瘤生长的抑制作用[J];肿瘤;2014年02期
2 郑立娟;马卫东;陈秉智;;纤维加强树脂夹板固定下颌前牙应力分布的有限元分析[J];实用口腔医学杂志;2012年06期
3 陈铁楼;刘国勤;蔺世龙;张新海;张庆福;赵海军;季秋杰;吴织芬;;冠桥固定重症牙周炎松动牙对牙龈微循环和牙周组织影响[J];口腔医学研究;2012年03期
4 Ioannis A Voutsadakis;;Molecular predictors of gemcitabine response in pancreatic cancer[J];World Journal of Gastrointestinal Oncology;2011年11期
5 冯蕊;何津祥;国晋菘;孙科;杨小慧;王静;;吴茱萸碱联合射线对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖、黏附和迁移的影响[J];肿瘤;2011年05期
本文编号：2881356
本文链接：https://www.wllwen.com/xiyixuelunwen/2881356.html
