两种不同的体外诱导人脐带间充质干细胞成软骨细胞方法的比较

发布时间：2020-12-04 12:24

　　该课题探讨了3D悬滴培养与贴壁培养体外诱导人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs）在成软骨分化特性上的差异。采用机械匀浆法和组织块贴壁培养法体外分离培养获得第5代h UC-MSCs,流式细胞术检测干细胞表面免疫标记物,经3D悬滴培养与贴壁培养诱导应用番红O和阿利辛蓝染色及荧光定量检测富含透明质酸糖胺聚糖的细胞外基质形成情况以及不同时间点（3天、7天、14天）成软骨相关基因ACAN、MIA、COL1A2、COL2A1和COL10A1表达,并用免疫组化染色的方法检测II型胶原的表达情况。结果显示,流式细胞术检测的第5代h UC-MSCs间充质干细胞表面标记物结果符合国际细胞疗法协会制定的鉴定标准; 3D悬滴培养的h UC-MSCs可形成致密的细胞聚合物,贴壁培养的细胞形态成长梭形;番红O和阿利辛蓝染色结果显示, 3D悬滴培养和贴壁培养的h UC-MSCs均能形成软骨细胞;但荧光实时定量PCR结果显示, 3D悬滴培养的h UC-MSCs形成软骨细胞的成软骨相关基因的表达明显多于贴壁培养细胞形成软骨细胞的成... 

【文章来源】：中国细胞生物学学报. 2019年10期 第1967-1975页

【文章页数】：9 页

【图文】：

第5代人脐带间充质干细胞的表面标记表达

hUC-MSCs细胞微球的形成和形态

3D悬滴培养和贴壁培养的第5代hUC-MSCs28天成软骨诱导后进行II型胶原免疫组化染色分析:对照组细胞质和细胞膜呈淡黄色,为弱阳性着色(图4A和图4D),成软骨细胞诱导组hUC-MSCs组细胞质和细胞膜呈棕黄色,为强阳性着色(图4B和图4E);3D悬滴培养和贴壁培养的细胞随机选取5个透明、非重叠样本区域,用Image-Pro Plus分析系统对II型胶原免疫组化染色阳性结果进行统计分析,结果显示,3D悬滴培养的诱导的第5代hUC-MSCs成软骨能力更强(图4C和图4F)。两组间比较用独立样本t检验。以P<0.05为有统计学差异。图4 3D悬滴培养和贴壁培养hUC-MSCs诱导28天成软骨II型胶原免疫组化染色结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响[J]. 张权,张亚奇,饶巍,周端鹏,韩兵,武栋成.  中国细胞生物学学报. 2019(01)
[2]人间充质干细胞体外成软骨分化能力综合评价策略研究[J]. 张可华,刘静,纳涛,袁宝珠.  中国新药杂志. 2017(18)



本文编号：2897603