人IFN-λ1的克隆表达及其在不同种属细胞中的抗病毒活性分析

发布时间：2020-12-05 20:47

　　目的测定IFN-λ1在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等4种不同种属来源细胞中的抗病毒活性。方法利用RT-PCR技术从人结直肠腺癌细胞（CaCo2）中扩增获得人IFN-λ1 （HuIFN-λ1）基因,然后克隆至真核表达载体pCDNA3.1-Flag-HA中,通过质粒转化、阳性菌落筛选、质粒提取及测序,获得重组质粒pCDNA3.1-HuIFN-λ1;利用脂质体将其转染293细胞,48 h后通过Western blot检测HuIFN-λ1瞬时表达情况,取转染后上清分别作用于CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK等四种不同种属来源细胞进行HuIFN-λ1抗病毒活性分析。结果从人结直肠腺癌细胞中扩增获得HuIFN-λ1基因,大小为600 bp,并在293细胞内成功表达HuIFN-λ1,表达产物能抑制VSVG在CaCo2、Vero、BHK-21、MDCK中的增殖,流式细胞仪检测经HuIFN-λ1处理的上述细胞荧光率分别为73.69%、80.12%、71.73%、69.47%。结论重组表达的人IFN-λ1蛋白对4种不同种属来源的细胞均存在一定的抗病毒活性,为研究人IFN-λ1在宿... 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019年10期 第1166-1170页 北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

图１ＨｕＩＦＮ－λ１基因的ＰＣＲ产物１％琼脂糖凝胶电泳分析

显示与ＧｅｎＢａｎｋ中登录的ＨｕＩＦＮ－λ１基因参考序列（ＡＹ１８４３７２．１）完全一致。ＭＤＮＡ标志物（ＤＬ２０００）１ＨｕＩＦＮ－λ１基因ＰＣＥ产物图１ＨｕＩＦＮ－λ１基因的ＰＣＲ产物１％琼脂糖凝胶电泳分析ＭＤＬ２０００ＤＮＡｍａｋｅｒ１ＨｕＩＦＮ－λ１Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＨｕＩＦＮ－λ１ｇｅｎｅ２重组表达质粒构建与鉴定以测序正确的ｐＥＡＳＹ－ＨｕＩＦＮ－λ１质粒为模板，用引物Ｂ重新扩增ＨｕＩＦＮ－λ１基因（图２），回收并通过无缝克隆方式连接到ｐｃＤＮＡ３．１－Ｆｌａｇ－ＨＡ表达载体上，获得重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１－ＨｕＩＦＮ－λ１，测序表明重组质粒构建成功。ＭＤＮＡ标志物（ＤＬ２０００）１ｐＥＡＳＹ－ＨｕＩＦＮ－λ１ＰＣＲ产物图２重组质粒ｐＥＡＳＹ－ＨｕＩＦＮ－λ１ＰＣＲ鉴定ＭＤＬ２０００ＤＮＡｍａｋｅｒ１ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｈｕｍａｎＩＦＮ－λ１（ＨｕＩＦＮ－λ１）Ｆｉｇ．２ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐＥＡＳＹ－ＨｕＩＦＮ－λ１ｇｅｎｅ３ＨｕＩＦＮ－λ１在２９３细胞中的表达鉴定重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１－ＨｕＩＦＮ－λ１转染２９３细胞４８ｈ，利用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ＨｕＩＦＮ－λ１瞬时表达情况，结果见图３，在（２２－２５）×１０３之间有单一反应条带，表达空白载体对照无此条带，表明ＨｕＩＦＮ－λ１在２９３细胞中成功表达且具有反应原性。Ｍ蛋白分子质量标准１空载体对照２重组ＨｕＩＦＮ－λ１与Ａｎｔｉ－Ｆｌａｇ抗体反应条带图３

图３重组ＨｕＩＦＮ－λ１的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测

【参考文献】：
期刊论文
[1]Ⅲ型干扰素——新型抗病毒细胞因子[J]. 杨祎,侯炜.  生命科学. 2011(08)
[2]猪α干扰素在大肠杆菌中的表达及抗病毒活性检测[J]. 崔保安,陈红英,张素梅,刘占通,金喜新,宋凌云.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2008(04)

博士论文
[1]猪α干扰素、猪β干扰素与猪γ干扰素的抗病毒活性及其免疫佐剂的研究[D]. 姚清侠.华中农业大学 2007

硕士论文
[1]猪Ⅲ型干扰素IFN-λ1的克隆、表达和抗病毒活性研究[D]. 赵付伟.华中农业大学 2010
[2]人IFN-λ1基因的克隆、表达及抗病毒活性的研究[D]. 王建红.苏州大学 2003



本文编号：2900068