MicroRNA-195调控LATS2对BEL-7402/5-Fu细胞凋亡的影响
发布时间：2020-12-06 01:05
目的：探讨miR-195调控LATS2对BEL-7402/5-FU细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：MicroRNA（miRNA）芯片分析BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞miRNA的表达差异，靶基因预测软件分析与LATS2基因相互作用的miRNA，筛选出miR-195为目的miRNA。将miR-195质粒载体及其阴性对照质粒瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞；荧光素酶报告基因实验验证miR-195调控的靶基因；倒置荧光显微镜和实时定量RT-PCR检测转染效率；MTT检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡率；实时定量RT-PCR检测mRNA水平，Western blot检测蛋白表达水平。结果：基因芯片检测结果表明下调两倍的miRNA有：miR-195，miR-18a，miR-122等，BEL-7402/5-FU比BEL-7402上调两倍的miRNA有：miR-18和miR-224；结合芯片结果及利用生物信息学筛选出miR-195作为研究对象；倒置荧光显微镜和实时定量RT-PCR检测，结果表明在miR-195转染的BEL-7402/5-FU细胞中miR-195表达水...
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：40 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MicroRNA芯片分析BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞中miRNA表达情况
图 1 MicroRNA 芯片分析 BEL-7402 和 BEL-7402/5-FU 细胞中 miRNA 表达情况*P<0.05 vs.BEL-7402/5-FU，Mean±SD，n=3二、生物信息学筛选目的 miRNA 并预测靶基因结合文献及 microRNA 芯片结果筛选目的 miRNA，通过 Microrna.org 和 Targetscan生物信息学软件预测靶基因。选取 miR-195 作为目的 miRNA 进行研究。（图 2）。
三、倒置荧光显微镜和实时定量 RT-PCR 检测 miR-195 转染情况质粒表达载体测序结果显示 miR-195 序列位于载体 122-140bp 间，说明载体构建成功（图 3）。miR-195 转染 BEL-7402/5-FU 细胞后 48 小时，通过倒置荧光显微镜观察转染细胞的荧光情况，各转染组的转染率均大于 35%（图 4）。实时定量 RT-PCR检测结果显示，miR-195 转染组较未转染组及阴性对照组的 miR-195 的表达明显上调（图 5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNA Expression Signature in Gastric Cancer[J]. Hong-chun Luo1,Zhen-zhen Zhang2,Xia Zhang3,Bo Ning3,Jin-jun Guo3,Na Nie1,Bo Liu1,Xiao-ling Wu3 1Department of Laboratory Medicine,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China 2The Key Laboratory for Molecular Biology of Infectious Diseases(Ministry of Education). The Institue for Viral Hepatitis,Chongqing University of Medical Science,Chongqing 400016,China 3Department of Gastroenterology,the Second Affiliated Hospital,Chongqing University of Medical S cience,Chongqing 400010,China. Chinese Journal of Cancer Research. 2009(01)
[2]miRNAs在头颈肿瘤中的研究进展[J]. 吴剑,李龙江. 口腔颌面外科杂志. 2008(03)
[3]Detection of let-7a microRNA by real-time PCR in gastric carcinoma[J]. Hong-He Zhang,Xian-Jun Wang,Guo-Xiong Li,Diagnostic Laboratory,Hangzhou First People’s Hospital,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China En Yang,Ning-Min Yang,Zhiyuan Medical Laboratory,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[4]Wild type p53 increased chemosensitivity of drug-resistant human hepatocellular carcinoma Bel7402/5-FU cells[J]. Yu-xiu LI, Zhi-bin LIN, Huan-ran TAN Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Peking University, Beijing, 100083, China. Acta Pharmacologica Sinica. 2004(01)
本文编号：2900423
【文章来源】：南华大学湖南省
【文章页数】：40 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
MicroRNA芯片分析BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞中miRNA表达情况
图 1 MicroRNA 芯片分析 BEL-7402 和 BEL-7402/5-FU 细胞中 miRNA 表达情况*P<0.05 vs.BEL-7402/5-FU，Mean±SD，n=3二、生物信息学筛选目的 miRNA 并预测靶基因结合文献及 microRNA 芯片结果筛选目的 miRNA，通过 Microrna.org 和 Targetscan生物信息学软件预测靶基因。选取 miR-195 作为目的 miRNA 进行研究。（图 2）。
三、倒置荧光显微镜和实时定量 RT-PCR 检测 miR-195 转染情况质粒表达载体测序结果显示 miR-195 序列位于载体 122-140bp 间，说明载体构建成功（图 3）。miR-195 转染 BEL-7402/5-FU 细胞后 48 小时，通过倒置荧光显微镜观察转染细胞的荧光情况，各转染组的转染率均大于 35%（图 4）。实时定量 RT-PCR检测结果显示，miR-195 转染组较未转染组及阴性对照组的 miR-195 的表达明显上调（图 5）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]MicroRNA Expression Signature in Gastric Cancer[J]. Hong-chun Luo1,Zhen-zhen Zhang2,Xia Zhang3,Bo Ning3,Jin-jun Guo3,Na Nie1,Bo Liu1,Xiao-ling Wu3 1Department of Laboratory Medicine,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China 2The Key Laboratory for Molecular Biology of Infectious Diseases(Ministry of Education). The Institue for Viral Hepatitis,Chongqing University of Medical Science,Chongqing 400016,China 3Department of Gastroenterology,the Second Affiliated Hospital,Chongqing University of Medical S cience,Chongqing 400010,China. Chinese Journal of Cancer Research. 2009(01)
[2]miRNAs在头颈肿瘤中的研究进展[J]. 吴剑,李龙江. 口腔颌面外科杂志. 2008(03)
[3]Detection of let-7a microRNA by real-time PCR in gastric carcinoma[J]. Hong-He Zhang,Xian-Jun Wang,Guo-Xiong Li,Diagnostic Laboratory,Hangzhou First People’s Hospital,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China En Yang,Ning-Min Yang,Zhiyuan Medical Laboratory,Hangzhou 310006,Zhejiang Province,China. World Journal of Gastroenterology. 2007(20)
[4]Wild type p53 increased chemosensitivity of drug-resistant human hepatocellular carcinoma Bel7402/5-FU cells[J]. Yu-xiu LI, Zhi-bin LIN, Huan-ran TAN Department of Pharmacology, School of Basic Medical Sciences, Peking University, Beijing, 100083, China. Acta Pharmacologica Sinica. 2004(01)
本文编号：2900423
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