自研培养基在人用鸡胚狂犬病疫苗中的应用

发布时间：2020-12-07 19:38

　　目的评估自主研发培养基QS作为首选培养基用于冻干人用狂犬病疫苗（鸡胚成纤维细胞）生产过程的可行性。方法分别制备基于自主研发培养基QS和其他3种商业化培养基（X1、X2、X3）的鸡胚成纤维细胞悬液,观察和比较细胞形态和生长特性;以Flury HEP株接种鸡胚成纤维细胞（MOI=0.003）,分别通过直接免疫荧光法、蛋白质印迹法（Western blotting）和酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）比较不同培养基条件下收获液中病毒滴度和G蛋白含量。结果在细胞浓度1×10⁶个/mL条件下,4种培养基培养的鸡胚成纤维细胞在形态上均无显著区别;但是自主研发培养基QS和X2的病毒收获液的G蛋白含量在第4天时分别为0.66 IU/mL和0.63 IU/mL,高于X1的0.5 IU/mL和X3的0.3 IU/mL。在第6天时分别为0.92 IU/mL和0.88 IU/mL,高于X1的0.64 IU/mL和X3的0.52 IU/mL,说明基于自主研发培养基QS和X2的病毒收获液在G蛋白含量方面具有明显优势。结论自主研... 

【文章来源】：微生物学免疫学进展. 2020年01期 第56-62页

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

4种不同培养基在两种细胞浓度下不同时间细胞计数结果

Flury HEP株在4种培养基条件下的多步生长曲线能够客观的反映4种环境中病毒的生长特性。重复3次实验结果显示,4种培养基病毒滴度均在种毒后3 d达到峰值,而后呈缓慢下降趋势直到6 d。种毒后3 d,QS和X2收获液中RABV 滴度含量均为8.17 lg CCID50/mL,略高于X1的7.72 lg CCID50/mL和X3的7.83 lg CCID50/mL,见图2。2.3 不同培养基条件下鸡胚成纤维细胞的形态学观察

病毒感染1～3 d时,各培养基条件下的细胞均无显著病变和脱落;随着时间的推移,细胞脱落增加,细胞的纤维收缩明显,直到感染后第6 天,4种培养基条件下种毒细胞的状态都没有明显区别,见图4。图4 4种培养基在种毒后第6天细胞脱落情况镜检

【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡胚细胞培养狂犬病病毒工艺的优化[J]. 郭采平,王春华,周兰贞,刘永娣,罗姗,张剑平,周维.  中国生物制品学杂志. 2015(06)
[2]德国产和印度产人用狂犬病疫苗(鸡胚细胞)瑞必补尔~的临床安全性和免疫原性研究[J]. 朱凤才,伍传宏,孟繁岳,晋梅,闫萌.  中国疫苗和免疫. 2009(05)
[3]狂犬病毒鼠脑复壮后的典型形态恢复及感染细胞内的形态发生学[J]. 韩小虎,邹啸环,江禹,宣华,涂长春.  微生物学报. 2008(06)
[4]狂犬病毒在Vero细胞上的传代适应[J]. 李宏玲,李河民,俞永新,严子林.  生物制品学杂志. 1989(02)



本文编号：2903795