应激状态下Tudor-SN蛋白的亚细胞定位与磷酸化分析

发布时间：2020-12-07 22:47

　　目的:Tudor-SN（Tudor Staphylococcal Nuclease）蛋白,又称为p100、SND1（staphylococcal nuclease domain containing 1）,广泛存在于人类、动植物中,可参与基因转录、细胞应激、pre-mRNA剪切等多种生物学过程。本课题组的前期研究结果表明当真核细胞受到外界刺激,如0.5mM亚砷酸钠氧化应激或45℃热休克时,Tudor-SN蛋白可以在细胞胞浆中形成颗粒状聚集,参与应激颗粒（Stress Granules,SGs）的构成。SGs是真核细胞受到氧化应激、热休克、病毒感染等各种环境刺激时在胞浆中产生的颗粒状结构,与mRNA代谢密切相关。本课题旨在深入探讨Tudor-SN蛋白的真核细胞应激生物学行为机制,主要关注应激状态下Tudor-SN蛋白的亚细胞定位与磷酸化分析。方法:本课题实验分为三部分,第一部分主要利用细胞免疫荧光（immunofluorescence,IF）技术分析不同应激条件、不同细胞周期时相HeLa细胞内Tudor-SN颗粒的形成情况,以及Tudor-SN应激颗粒与细胞器、自噬颗粒的共定位关系;第二... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：117 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１人类Ｔｕｄｏｒ－ＳＮ蛋白结构示意图??

特异性抑制?ｍＴＯ民Ｃ１?（ｍｅ浊ａｎｉｓｔｉｃｔａｒｇｅｔｃｏｍｐｌｅｘ?１?ｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ），进而诱导自喧??发生。Ｗ抗ＤＣＰｌａ和抗Ｇ３ＢＰ抗体可Ｗ检测内源性ＤＣＰｌａ?（ＰＢｓ的标记蛋白）??和Ｇ３ＢＰ蛋白（Ｓ说的标记蛋白）的颗粒形成。如图１．５所示，自嗤颗粒、加工??体、应激颗粒并不存在共定位关系。此外，将ＰＥＲＦＰ－Ｃ１－Ｇ３ＢＰ质粒转染入??ＧＦＰ－ＬＣ３－ＨｅＬａ细胞，Ｗ活细胞工作站实时监测应激颗粒与自唆颗粒两者的共定??位情况，结果（图１．６）发现，在给予化２５?ｍＭ亚神酸钢与３００ｎＭ雷帕霉素处??理４．化过程中，均未观察到两者的共定位。??２３??

扇圆图圓固圍??Ｎｏｔｅ：?＃?ａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ?＆?ｓｔｒｅｓｓ?ｇｒａｎｕｌｅｓ?？?Ｕｎｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ??图１．４化ｄｏｒ－ＳＮ颗粒与自嗤颗粒的共定位分析??Ｆｉｇｕｒｅ?１．４?Ｔｈｅ?ｃｏ－ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?Ｔｕｄｏｒ－ＳＮ?ｇｒａｎｕｌｅｓ?ａｎｄ?ａ山ｏｐｈａｇｏｓｏｍｅ．??为了进一步确定自隨颗粒与应激颗粒（ＳＧｓ）、加工体（ＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇＢｏ出ｅｓ，??ＰＢｓ）的相关化便进行了Ｈ色巧光共定位分析。常规培养ＧＦＰ－ＬＣ３－ＨｅＬａ细胞，??给予化２５?ｍＭ亚神酸钢与３００ｎＭ雷帕霉素（Ｒａｐａｍｙｃｉｎ）处理化。雷帕霉素可??特异性抑制?ｍＴＯ民Ｃ１?（ｍｅ浊ａｎｉｓｔｉｃｔａｒｇｅｔｃｏｍｐｌｅｘ?１?ｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎ），进而诱导自喧??发生。Ｗ抗ＤＣＰｌａ和抗Ｇ３ＢＰ抗体可Ｗ检测内源性ＤＣＰｌａ?（ＰＢｓ的标记蛋白）??和Ｇ３ＢＰ蛋白（Ｓ说的标记蛋白）的颗粒形成。如图１．５所示，自嗤颗粒、加工??体、应激颗粒并不存在共定位关系。此外，将ＰＥＲＦＰ－Ｃ１－Ｇ３ＢＰ质粒转染入??ＧＦＰ－ＬＣ３－ＨｅＬａ细胞，Ｗ活细胞工作站实时监测应激颗粒与自唆颗粒两者的共定??位情况，结果（图１．６）发现，在给予化２５?ｍＭ亚神酸钢与３００ｎＭ雷帕霉素处??理４．化过程中


本文编号：2904016