鲍曼不动杆菌UspA蛋白的克隆表达及生物信息学分析

发布时间：2020-12-09 15:11

　　目的克隆表达及纯化鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）普遍应急蛋白A（Universal stress protein A,UspA）,并进行生物学预测和分析。方法查询鲍曼不动杆菌UspA基因序列,设计特异性PCR引物,以提取的鲍曼不动杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增UspA片段。回收目的片段,连接到质粒pET28a,转化大肠埃希菌,37℃培养后,进行PCR扩增并测序。将重组质粒转入表达菌,加入IPTG诱导重组UspA蛋白表达,并经Ni²⁺亲和层析纯化。采用生物信息学软件分析UspA蛋白的生物学特性。结果获得全长为444bp的鲍曼不动杆菌UspA基因,且成功构建了重组质粒pET28a-UspA,得到纯度较高的相对分子质量17×10³的重组UspA蛋白。该蛋白为细菌的胞质蛋白,其α-螺旋占51%,延伸链占27%,无规卷曲的含量占31%。由2个同源UspA蛋白分子构成二聚体。结论成功克隆表达了鲍曼不动杆菌UspA蛋白,该蛋白可能含B细胞表位,而具有免疫原性,为其生物学活性及耐药机制研究提供了理论基础。 

【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019年12期 第1365-1369页 北大核心

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

PCR扩增UspA基因

将重组质粒pET28a-UspA转化表达菌BL21后得到能够表达重组UspA蛋白的重组菌。挑取单菌落到LB培养基中培养过夜，将其接种到新培养基后用IPTG诱导目的蛋白的表达，使用Ni 2+亲和层析柱纯化重组UspA蛋白，SDS-PAGE电泳分析蛋白分子质量及纯度，结果见图2。该蛋白相对分子质量约17×103，与理论值相符。柱层析后的蛋白为单一电泳条带，纯度较高。3 UspA蛋白的理化特性

生物信息学分析UspA蛋白共有147个氨基酸，总原子数为2 267，理论相对分子质量为15.8×103，理论pI是5.59。UspA蛋白的不稳定系数为33.3，<阈值40，推测为稳定蛋白。该蛋白的平均亲水性值是0.271，为非亲水性蛋白。在线软件Phobius预测UspA蛋白定位在细菌细胞质，且无信号肽（图3）。4 UspA蛋白的结构

【参考文献】：
期刊论文
[1]血流感染泛耐药鲍曼不动杆菌耐药和基因型分析[J]. 姜丽,贾萌,高飞,吕品,李江,朱尊民.  中国病原生物学杂志. 2018(04)



本文编号：2907062