重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建的实验研究

发布时间：2020-12-11 01:36

　　目的本研究旨在构建并制备增强型荧光蛋白（EGFP）基因和Klotho基因重组腺病毒载体AdEGFP-Klotho,并将其感染HEK293细胞,为基因治疗提供研究基础。方法设计含有NheⅠ与NotⅠ双酶切位点的引物,应用PCR方法扩增Klotho基因,将其连接到EGFP标记的pDC316-mCMV穿梭质粒上,构建重组穿梭质粒pDC316-mCMV-EGFP-Klotho,利用Polyfectin脂质体将骨架质粒和重组穿梭质粒共转染HEK293细胞进行同源重组,得到重组腺病毒Ad-EGFP-Klotho,并包装扩增,测定病毒颗粒数及滴度。采用PCR方法对重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho进行鉴定,并进行Klotho基因测序。结果经PCR和NheⅠ、NotⅠ双酶切鉴定,重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho中证实含有Klotho基因,测序结果和设计序列比对一致,重组腺病毒载体Ad-EGFP-Klotho构建成功。滴度为2.0×1010 Tu/mL,成功感染HEK293细胞,感染复数（MOI）=100,感染效率达91.75%,从Ad-EGFP-Klotho重组腺病毒载体中可以检测到... 

【文章来源】：重庆医学. 2019年23期 第3970-3973页

【文章页数】：4 页

【部分图文】：

重组穿梭质粒pDC316-CMV-EGFP-Klotho酶切鉴定结果

重组腺病毒Ad-EGFP-Klotho转染HEK293细胞，转染8d后细胞表现出CPE现象，置于荧光显微镜下观察，可见大量表达EGFP，见图3。图3 Klotho和EGFP转染后到获得重组腺病毒的EGFP表达图

Klotho和EGFP转染后到获得重组腺病毒的EGFP表达图

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组腺病毒载体Ad5-hTRX-EGFP的构建及其表达[J]. 扈江伟,王军,徐曼,苏永锋,孔维霞,盛红霞,张斌,陈虎.  中国实验血液学杂志. 2012(03)



本文编号：2909659