重组人松弛素对舒张性心力衰竭模型兔心肌组织蛋白激酶G活性的调控研究

发布时间：2020-12-12 13:52

　　[目的]随着社会老龄化问题日趋严重,舒张性心力衰竭（DHF）所占比重及发病率逐年提高,而松弛素今年近几年来发现具有心血管保护作用,我们既往研究已经发现松弛素可以改善DHF模型兔的舒张功能,但是其具体机制不明。藉此,我们探索人重组松弛素（RLX）对舒张性心力衰竭（DHF）模型兔心肌组织蛋白激酶G（PKG）活性的调控作用,旨在揭示重组人松弛素改善DHF舒张功能的病理生理机制,进一步为DHF的临床靶向治疗提供重要实验基础。[方法]1.采用腹主动脉缩窄术建立DHF模型兔,新西兰家兔42只随机分为假手术组（Sham组,6只）、DHF组（12只）、RLX小剂量组（12只）、RLX大剂量组（12 只）。2.术后8周,剔除术后死亡及不符合DHF诊断的家兔,经耳缘静脉注射给予RLX药物,RLX小剂量组为30μg/kg·d,大剂量组为98μg/kg·d,持续经兔耳缘静脉给药2周。3.术后第10周,取血清标本,分别采用酶联免疫吸附测定方法（ELISA）检测脑钠肽（BNP）、松弛素（RLX）浓度,制备10%心肌匀浆液分别采用ELISA方法检测3-硝基酪氨酸（3-NT）、一氧化氮（NO）、环磷酸鸟苷（cGMP）... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：39 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．采用腹主动脉缩窄法建立ＤＨＦ模型??

待各组家兔抽血完毕后，将抽取，４０００ｒｐｍ／ｍｉｎ持续约１０分钟，离心后取０．４ｍｌ免疫法（ＥＬＩＳＡ法）检测各组家兔钠尿肽（ＢＮ含量，并进行对比。检测方法严格按照试剂说明肌匀浆液??］方法制作心肌匀浆液：１．处死：采用空气栓塞法心脏。２．取心肌组织：预冷的生理盐水充分洗、心房、右心室及脂肪组织等，切取部分左心色切片。３．研磨：按１：?９的体质量体积比加入浴中充分研磨制成均匀的１０％匀浆液。４．离心３ｌ上清液－２０°Ｃ备检。待标本收集完毕后，采用Ｅ浆上清液３－ＮＴ，?ＮＯ、ｃＧＭＰ、ＰＫＧ水平，并对各组按照试剂说明书。??：

对心肌组织块进行约３０分钟的透明处理。再将心肌组织块放入石蜡中吸取组织??内含有的透明剂；将浸蜡后的组织块置入溶化的固体石蜡中５分钟，组织被石蜡??全包埋后即可；??３．切片、贴片与烘干：将组织蜡块修整后，置于病理组织切片机进行切片处??，用眼科镊子将切成厚度约３－５ｕｍ的蜡带打开平铺在４０－５ＣＴＣ恒温的水面上，待??带充分展开后捞起放置于载玻片上，６０＿６５°Ｃ恒温箱内烤片１５ｍｉｎ左右；??二、心肌纤维Ｍａｓｓｏｎ染色：以上步骤完毕后，放入Ｍａｓｓｏｎ蓝化液返蓝５ｍｉｎ、??洗，再用丽春红品红染色液染色５－１０ｍｉｍ再用磷钼酸溶液洗ｌ－２ｍｉｍ按蒸馏??：弱酸溶液＝２：１比例配置弱酸工作液清洗ｌｍｉｎ，直接放入苯胺蓝染色液中染色??－２ｍｉｎ，再用弱酸工作液体清洗ｌｍｉｎ，再用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树??封固。Ｍａｓｓｏｎ染色完成后，用４００倍显微镜观察组织，蓝色代表心肌胶原纤维、??胞核，而红色代表细胞质、肌纤维、红细胞。??


本文编号：2912679